химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

используют растворитель или раствор, содержащий все компоненты, кроме исследуемого вещества.

Спектрофотометрия основана на измерении поглощения монохроматических излучений. Современные спектрофотометры (призменные приборы или приборы с дифракционными решетками) дают высоко-монохроматизированный поток излучения. Они применяются для концентрационного анализа и при изучении спектров поглощения веществ.

Растворы для исследования должны быть прозрачными, без пузырьков йоздуха, способствующих увеличению рассеивания света. Нельзя исследовать холодные растворы, так как на стенках кювет могут конденсироваться пары воды. Кюветы нужно заполнять до такого уровня, чтобы поток излучения проходил целиком через слой раствора. В кюветное отделение их устанавливают в строго определенном порядке. Кюветы требуют специального ухода. Капли, царапины и грязь на их стенках сильно рассеивают и поглощают свет, что при-"водит к искажению результатов. Кюветы следует тщательно мыть дистиллированной водой, перед употреблением просушивать. Касаться руками их оптических стенок нельзя. Кюветы очень хрупкие, особенно Кварцевые, которые используют при работе в ультрафиолетовой области Спектра, поэтому с ними надо обращаться осторожно, не допускать механических повреждений.

Широкое распространение получили спектрофотометрические методы количественного определения веществ, имеющих характерные максимумы поглощения: белков (с. 83), нуклеиновых кислот (с. 162), нуклеотидов (с. 180).

Для некоторых биологических молекул разработаны энзиматиче-ские методы количественного определения. Они основаны на том, что под влиянием специфического действия фермента на определяемое вещество образуется эквимолекулярное количество продукта реакции, обладающего характерным спектром поглощения. Так, пировиноград-ную или молочную кислоту можно количественно определить с использованием лактатдегидрогеназы (с. 31).

СН3СОСООН + НАДН + Н+ ^ СН3СНОНСООН + НАД+.

Спектры поглощения восстановленной и окисленной форм пиридиновых нуклеотидов существенно отличаются: спектр поглощения НАД+ имеет максимум при длине волны 260 нм, спектр поглощения НАДН — при 340 нм. Таким образом, метод сводится к количественному определению убыли или прироста восстановленного никотинамидаденинди-нуклеотида. Для этого регистрируют изменение оптической плотности реакционной смеси при 340 нм. Коэффициент молярного поглощения НАДН (НАДФН) при 340 нм равен 6,22-103 М-1 см-1. При расчетах исходят из того, что при окислении—восстановлении 1 мкмоль кофер-мента при 340 нм в кювете с расстоянием между рабочими гранями 1 см в 1 мл реакционной смеси оптическая плотность меняется на 6,22 ед. Количество определяемого вещества в пробе (в микромолях) рассчитывают по формуле:

х = AAmV 6,22 '

где ДЛ340 — изменение оптической плотности реакционной смеси; V — объем пробы (мл), в которой протекает реакция. Спектрофото-метрическое определение НАДН и НАДФН используется при определении активности многих ферментов (с. 208). Иногда при высоких концентрациях НАДН в кювете целесообразно проводить определение, снижая чувствительность метода, т. е. не в максимуме поглощения восстановленного нуклеотида. Так, при 366 нм коэффициент молярного поглощения НАДН уменьшается почти вдвое и становится равным 3,3-103 М-1 см-1.

Наряду со спектрофотометрическими методами в концентрационном анализе широко применяются колориметрические методы. Многие соединения, обладающие незначительным поглощением, после реакции с другими веществами дают окрашенные продукты, количество которых пропорционально количеству исходного вещества. В биохимии такие цветные реакции используют для обнаружения вещества в растворе и определения его концентрации. Широкое распространение получили колориметрические методы количественного определения неорганического фосфата и фосфорсодержащих соединений (с. 33), гликогена, глюкозы (с. 23), фруктозы (с. 41), белка (с. 80). Для работы обычно используют упрощенные спектрофотометры или фото-электроколоримет^ы (ФЭК). Современный ФЭК представляет собой оптический прибор, в котором монохроматизация потока излучения осуществляется с помощью светофильтров. Каждый светофильтр характеризуется длиной волны максимума и полушириной пропускания.

Колориметрический анализ проводят сравнением поглощения исследуемого раствора с поглощением проб стандартного ряда. Пробы ^стандартного ряда с возрастающим содержанием анализируемого .вещества готовят из раствора точной концентрации. При этом учитывают границы чувствительности данного конкретного метода. «Нулевая проба» должна содержать все компоненты, за исключением анализируемого вещества. Необходимо помнить, что интенсивность окраски определяется концентрацией вещества, но зависит также от температуры и времени развития окраски. Поэтому опытные и стандартные пробы должны быть обработаны в строго определенных одинаковых условиях.

При колориметрировании рекомендуется соблюдать следующую очередность в работе: 1) выбрать светофильтр; 2) выбрать кюветы; 3) определ

страница 3
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
армированные тормозные шланги для авто
игрушки с приколами
ширма купить в икеа фото и цены
курсы 3d мытищи

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(08.12.2016)