химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

ИФОСФАТА В МОЛОЧНУЮ КИСЛОТУ

Используя экстракт мышц, не содержащий митохондрий, можно наблюдать за превращением как гликогена, так и любого промежуточСхема проведения опыта

Состав пробы, мл Время инкубации мин

пробы гликоген MGCIS АДФ НАД+ н2о NaF экстракт

1,2 3,4 5,6 0,5 0,5 0,5 0,2 0,2 0,2 0,5 0,5 0,5 ООО

сл сл сл 0,3 0,3 ООО 30

30

ц ного продукта гликогенолиза в молочную кислоту. Фторид является ингибитором енолазы, осуществляющей превращение 2-фосфоглнцери-новой кислоты в фосфоенолпируват, поэтому в его присутствии молочная кислота образовываться не будет.

В задаче предлагается проследить за убылью фруктозо-1,6-дифос-фата и образованием фосфоглицериновой и молочной кислот в процессе инкубации экстрактов мышц в присутствии фторида и без него.

Реактивы:

1. Калий-фосфатный буфер — 0,05 М раствор, рН 7,4.

2. Фруктозо-1,б-дифосфат (натриевая соль) — 0,01 М раствор, рН 7,4.

3. Фтористый натрий (iNaF) —0,6 М раствор, рН 7,4.

4. MgCl2-6H20 —0,1 М раствор.

5. СС13СООН — 5%-ный раствор или НС104 — 0,5 н. раствор.

6. Реактивы для определения фруктозо-1,6-дифосфата по фруктозе (с. 42).

7. Реактивы для определения молочной кислоты с /г-оксидифени-лом (с. 27) или энзиматическим методом (с. 28).

8. Реактивы для определения фосфоглицериновой кислоты методом бумажной хроматографии (с. 46).

Используют экстракт, не содержащий митохондрий (см. с. 50).

Схема проведения опыта

№ пробы СОСТАВ Пробы, МЛ Время ичкубацин, мин

фруктозо-1,6-Дифос-фат MgCl2 н2о NaF буфер рН 7,4 20%-ный экстракт

1,2 1,0 0,1 0,1 0,8 1,0

3,4 1,0 0,1 0,1 — 0,8 1,0 20

5,6 1,0 0,1

0,1 0,8 1,0 20

В пробы 1 и 2 (пробы «до инкубации») приливают трихлоруксусную кислоту (3 мл 5%-ный раствор) перед добавлением тканевого экстракта.

После добавления экстракта пробы 3—6 ставят на инкубацию в водяной термостат при 26° С. После инкубации пробирки помещают в лед и в каждую добавляют по 3 мл раствора трихлоруксусной кислоты. Денатурировавшие белки удаляют. В безбелковом растворе определяют фруктозо-1,6-дифосфат и молочную кислоту. Если предполагают определять содержание фосфоглицериновой кислоты методом бумажной хроматографии и молочной кислоты энзиматическим методом, белки осаждают хлорной кислотой. Безбелковый фильтрат необходимо нейтрализовать 5 н. раствором КОН и осадок перхлората калия удалить (с. 29). В полученном растворе определяют фруктозо-1,6-дифос-фат, фоофоглицериновую и молочную кислоты.

ВЛИЯНИЕ КОФАКТОРОВ НА ПРЕВРАЩЕНИЕ ФРУКТОЗО-1,6-ДИФОСФАТА В ПРИСУТСТВИИ ФТОРИДА

Превращение фруктозодифосфата под влиянием ферментов, содержащихся в экстракте мышц, в присутствии фторида (ингибитора енолазы) тормозится на стадии образования 2-фосфоглицериновой кислоты. В такой системе можно исследовать влияние НАД+ и АДФ на превращение фосфоглицеринового альдегида, образующегося в результате альдолазното расщепления фруктозо-1,6-дифосфата. Ускорение глико-литической оксидоредукции и фосфоглицераткиназной реакции при добавлении НАД+ и АДФ приведет к большей убыли фруктозо-1,6-ди-фосфата в процессе инкубации.

Предлагается сравнить убыль фруктозо-1,б-дифосфата в отсутствие добавок с глубиной его превращения в присутствии указанных кофакторов, добавляемых порознь и совместно.

Реактивы:

1. Калий-фосфатный буфер — 0,05 М раствор, рН 7,4. 2. Фруктозо-1,б-дифосфат(натриевая соль)—0,02 М раствор, рН 7,4.

3. MgCl2-6H20 —0,1 М раствор.

4. АДФ —0,01 М раствор.

5. НАД+ —0,006 М раствор.

6. NaF —0,6 М раствор, рН 7,4.

7. Трихлоруксусная кислота — 5%-ный раствор.

8. Реактивы для определения фруктозодифосфата по фруктозе (с. 42).

Растворы АДФ и НАД готовят на 0,05 М калий-фосфатном буфере, рН 7,4.

Экстракт мышц без митохондрий (с. 50) перед опытом разводят в два раза 0,05 М калий-фосфатным буфером, рН 7,4. Если экстракт хранился в замороженном виде, его размораживают перед опытом^ проверяют рН и вдвое разбавляют буфером.

Схема проведения опыта

пробы Состав пробы, мл Время нпкубгцни мин

фруктозо-1,6 дифосфат MgCl2 NaF АДФ НАД+ Н„0 j буфер 10%-ЬЬ'Й

экстракт

1,2

3,4 5,6 7,8 9,10 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 о о о о о 1 о о о о

0,5 0,5 0,5 0,5 0,4 0,3 0,3 0,3 0,3 1.0 1,0

0,5 0,5 о о о о о 20 20 20 20

В пробы 1 и 2 (пробы «до инкубации») приливают по З'мл 5%-но-го раствора трихлоруксусной кислоты перед добавлением экстракта.

Пробы 3—10 после добавления экстракта ставят в водяной термостат при 26° С на инкубацию. После инкубации их помещают в лед и добавляют по 3 мл трихлоруксусной кислоты. Денатурировавшие белки удаляют. В безбелковом растворе определяют фруктозо-1,6-дифосфат по фруктозе. Рассчитывают убыль фруктозодифосфата в процессе инкубации. Полученные данные представляют в виде диаграммы.

ВЛИЯНИЕ КИСЛОРОДА НА ПРОЦЕСС ГЛИКОЛИЗА (ЭФФЕКТ ПАСТЕРА)

Эффект Пастера — торможение гликолиза дыханием — можно наблюдать при инкубации тканевого экстракта, содержащего митохон"дрии, с субстратами гликолиза параллельно в атмосфере 02 и N2 (или Аг). Об интенсивности глик

страница 28
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
гольфы волейбольные asics
Cross Gl (глянец)
обучение парикмахеров
taxibox.ru

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(03.12.2016)