химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

но ингибируют глюкозооксидазу, пробы со стандартным раствором глюкозы обрабатывают так же, как и опытные. Для построения калибровочного графика готовят ряд пробирок, содержащих от 300 до 1200 мкг глюкозы (стандартного раствора). Объем проб доводят дистиллированной водой до 3 мл, в контрольную пробу (без глюкозы) вносят 3 мл дистиллированной воды. Затем в каждую пробу добавляют по 2 мл 5%-ного раствора ZnS04-7H20 и по 1 мл 0,3 н. раствора NaOH. Осадок гидроокиси цинка удаляют центрифугированием или фильтрованием. Из каждой пробы отбирают по 0,5 мл раствора в чистые и сухие пробирки, приливают по 0,5 мл дистиллированной воды и по 3 мл «рабочего реактива», перемешивают и фотометрируют развившуюся синюю окраску при 630 нм. Предварительно определяют время, необходимое для развития максимальной окраски (с. 20).

ГЛИКОЛИЗ В ПРИСУТСТВИИ ЙОДАЦЬТАТА

Центральной реакцией анаэробного превращения углеводов является реакция окисления глицеральдегид-3-фосфата в 1,3-дифосфогли-цериновую кислоту, которую катализирует глицеральдегид-3-фосфат-дегидрогеназа (КФ 1.2.1.12). Дегидрогеназу ингибируют алкилирующие агенты, например йодацетат, который необратимо связывает SH-rpynлы фермента. В присутствии йодацетата (конечная концентрация IX Х10~3 М) процесс гликолиза тормозится на стадии образования три-озофосфатов. В инкубационной среде происходит накопление фрукто-зодифосфата, так как равновесие альдолазной реакции сдвинуто в сторону образования фруктозо-1,6-дифосфата.

В задаче предлагается исследовать превращение гликогена экстрактами мышц, не содержащими митохондрий, в присутствии йодацетата и без него. Об интенсивности процесса судят по убыли гликогена и образованию фруктозо-1,6-дифосфата и молочной кислоты.

Реактивы:

1. Калий-фосфатный буфер — 0,05 М раствор, рН 7,4.

2. Гликоген—1%-ный раствор, приготовлен на калий-фосфатном буфере 0,05 М, рН 7,4.

3. MgCl2-6H20 —0,03 М раствор.

4. Йодацетат (CH2JCOOH) — 0,01 М раствор, рН 7,4.

5. Хлорная кислота — 0,5 н. раствор.

6. КОН — 5 н. раствор.

7. Реактивы для определения гликогена (с. 23).

8. Реактивы для определения фруктозодифосфата с резорцином (с. 42).

9. Реактивы для определения молочной кислоты с п-оксидифени-дом (с. 27) или энзиматическим методом (с. 28).

Используют экстракт мышц без митохондрий (с. 50).

Схема проведения опыта

№ пробы Состчв пробы, мл Время инкубации, мин

гликоген MgCl2 нао буфер йод-ецет^т 20%-чый экстракт

1,2 0,5 0,2 1,0 0,3 1,0

3,4 0,5 0,2 0,3 1,0

1,0 30

5,6 0,5 0,2 — 1,0 0,3 1,0 30

В пробы 1 и 2 (пробы «до инкубации») добавляют хлорную кислоту (3 мл 0,5 н. раствора) до прибавления экстракта.

Пробы 3—6 после добавления экстракта мышц ставят на инкубацию в водяной термостат при 37° С. После инкубации пробирки помещают в лед и в каждую приливают равный объем хлорной кислоты. Осадок белка удаляют. В безбелковом растворе определяют содержание гликогена, фруктозо-1,б-фосфата и молочной кислоты.

ГЛИКОЛИЗ В ПРИСУТСТВИИ ФТОРИДА

Превращение 2-фосфоглицерата в фосфоенолпируват является второй реакцией гликолиза, в результате которой образуется соединение с макроэргической связью:

снрн О" СН3 О" \ / И" /

CHO—Р=0 L™^-^CO — р=о + н2о.

I \ I \

ахг о~ СОО- 0~

Реакцию катализирует фермент фосфопируватгидратаза (енолаза, КФ* 4.2.1.11). Фермент ингибируется фторидом (конечная концентрация фторида 0,02 М) особенно в присутствии фосфата. Считают, что инги-бирующее влияние оказывает М.?2+-фторфосфатный комплекс. Таким образом, добавление в инкубационную среду фторида прерывает гликолиз на стадии превращения фосфоглицериновых кислот и приводит К накоплению 3-фосфоглицерата. В этих условиях образования сколь-ких-либо заметных количеств молочной кислоты не происходит.

Реактивы:

1. Калий-фосфатный буфер — 0,05 М раствор, рН 7,4. 2. Гликоген — 1%-ный раствор.

3. MgCl2-6H20 — 0,03 М раствор.

4. АДФ —0,012 М раствор.

5. НАД+ —0,006 М раствор.

6. NaF — 0,2 М раствор, рН 7,4.

7. КОН — 5 н. раствор.

8. Реактивы для определения гликогена (с. 23).

9. Реактивы для определения фосфоглицериновой кислоты методом бумажной хроматографии (с. 46).

10. Реактивы для определения молочной кислоты с я-оксидифени-лом (с. 27).

Растворы гликогена, АДФ и НАД готовят на 0,05 М калий-фосфатном буфере, рН 7,4.

Используют экстракт мышц без митохондрий (с. 50).

В пробы 1 и 2 (пробы «до инкубации») хлорную кислоту (3 мл 0,5 н. раствора) добавляют перед прибавлением экстракта.

Пробы 3—6 после добавления экстракта инкубируют в водяном термостате при 37° С. После инкубации пробирки помещают в лед и в каждую приливают равный объем хлорной кислоты. Осадок белка удаляют. Так как содержание фосфоглицериновой кислоты определяют методом бумажной хроматографии, безбелковый раствор необходимо нейтрализовать 5 н. раствором КОН и осадок перхлората калия удалить (с. 29). В полученном растворе определяют гликоген, фосфогли-цериновую и молочную кислоты.

ВЛИЯНИЕ ФТОРИДА НА ПРЕВРАЩЕНИЕ ФРУКТОЗО-1,6-Д

страница 27
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
узи малого таза это
atlant хм 6324
3d буквы светящиеся купить
ледовое шоу навки руслан и людмила купить

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(26.09.2017)