химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

ьтруют через четыре слоя влажной марли. Хранят до опыта в холодильнике. Работать необходимо со свежевыделенным экстрактом. Только в крайних случаях, когда работа не может быть выполнена в день получения, экстракт замораживают и в таком виде хранят. Предварительно измеряют рН, доводят его до значения 7,4.

АНАЭРОБНЫЙ РАСПАД ГЛИКОГЕНА (ГЛИКОГЕНОЛИЗ)

Гликоген — основной субстрат анаэробного распада углеводов в •скелетной мускулатуре. В задаче предлагается исследовать влияние добавления АДФ на интенсивность гликогенолиза. Об интенсивности гликогенолиза судят по убыли гликогена и по образованию молочной кислоты.

Реактивы:

1. Калий-фосфатный буфер — 0,05 М раствор, рН 7,4.

2. Гликоген— 1%-ный раствор.

3. MgCl2-6H20 — 0,03 М раствор.

4. АДФ —0,012 М раствор.

5. НАД+ —0,006 М раствор.

6. Трихлоруксусная кислота (СС13СООН)—5%-ный раствор или хлорная кислота (НС104)—0,5 н. раствор.

7. КОН — 5 н. и 30%-ный раствор.

8. Реактивы для определения гликогена с антроном (с. 23).

9. Реактивы для определения молочной кислоты с я-оксидифени-лом (с. 27) или энзиматическим методом с лактатдегидрогена-зой (с. 28).

Растворы гликогена, НАД+ и АДФ готовят на 0,05 М калий-фосфатном буфере, рН 7,4.

Экстракт мышц без митохондрий (с 50) перед опытом разводят 0,05 М калий-фосфатным буфером (рН 7,4) в 2 раза. При инкубации гликогена с экстрактом в качестве кофактора добавляют НАД+.

В пробы 1 и 2 (пробы «до инкубации») трихлоруксусную кислоту (3 мл 5%-ного раствора) вносят перед добавлением тканевого экстракта.

Пробы 3—6 после добавления экстракта ставят в водяной термостат при 37°С на инкубацию. После 30 мин инкубации их помещают в лед и приливают равный объем (3 мл) СС13СООН. Осадок белка удаляют. В безбелковом растворе каждой пробы определяют содержание гликогена и молочной кислоты с я-оксидифенилом. При определении молочной кислоты энзиматическим методом (с. 27) белки осаждают равным объемом 0,5 н. раствора хлорной кислоты. Из безбелкового раствора хлорную кислоту удаляют в виде перхлората калия (с. 29). Полученный раствор используют для определения молочной кислоты и гликогена.

АНАЭРОБНЫЙ РАСПАД ГЛЮКОЗЫ (ГЛИКОЛИЗ)

Анаэробный процесс превращения глюкозы начинается с реакции образования глюкозо-6-фосфата, катализируемой ферментом гексоки-назой (КФ 2.7.1.1.):

глюкоза + АТФ гек"аза->- глюкозо-6-фосфат + АДФ.

Добавляя в инкубационную среду НАД+-акцептор водорода, можно исследовать его влияние на процесс гликолиза. Об интенсивности гликолиза судят по убыли глюкозы и приросту молочной кислоты. Предлагается сравнить интенсивность гликолиза с добавлением НАД+ и без НАД-К

Реактивы:

1. Калий-фосфатный буфер — 0,05 М раствор, рН 7,4.

2. Глюкоза — 0,03 М раствор, приготовлен на 0,05 М калий-фосфатном буфере, рН 7,4.

3. АТФ — 0,048 М раствор, приготовлен на 0,05 М калий-фосфатном буфере, рН 7,4.

4. НАД+ —0,006 М раствор, рН 6,5.

5. MgCl2'6H20 —0,150 М раствор.

6. СС13СООН — 5%-ный раствор или НСЮ4 — 0,5 н. раствор.

7. ZnS04-7H20— 5%-ный раствор,

8. NaOH —0,3 н. раствор.

9. Реактивы для определения глюкозы с глюкозооксидазой (с. 19).

10. Реактивы для определения молочной кислоты с я-оксидифенилом (с. 27) или энзиматическим методом (с. 28).

Экстракт мышц без митохондрий (с. 50) перед опытом разбавляют 0,05 М калий-фосфатным буфером (рН 7,4) в 2 раза.

Схема проведения опыта

№ пробы Состав пробы, мл СРЕМЯ инкубации, МИН

глюкоза MgCI2 АТФ НАД+ фосфатный буфер вода 10% "Ый

экстракт

1,2

3,4 5,6 0,5 0,5 0,5 0,2 0,2 0,2 0,5 0,5 0,5 - 1 0,3

— 0,3 0,5 0,3 0,5 0,5 1,0 1,0 1,0 30 30

При заполнении проб пробирки ставят в лед. Тканевый экстракт добавляют в пробы 1 и 2 (пробы «до инкубации»). После добавления экстракта и перемешивания часть реакционной смеси быстро отбирают для определения глюкозы и молочной кислоты в заранее приготовленные пробирки с соответствующими осадителями белков: для определения глюкозы с глюкозооксидазой по 0,5 мл раствора из каждой пробы переносят в пробирки, содержащие 2,5 мл Н20, 2 мл 5%-го раствора сернокислого цинка и 1 мл 0,3 "н. раствора NaOH, а для определения молочной кислоты по 2 мл исследуемого раствора переносят в пробирки, содержащие 2 мл 5%-кого раствора трихлоруксусной кислоты или 2 мл 0,5 н. раствора хлорной кислоты. После этого экстракт ткани добавляют в пробы 3—6, пробирки ставят в водяной термостат при 37°С. После инкубации пробы обрабатывают, как описано выше (для осаждения белков). Для определения глюкозы из проб 3—6 отбирают по 1 мл раствора и переносят в пробирки, содержащие 2 мл Н20, 2 мл 5%-ного раствора сернокислого цинка и 1 мл 0,3 н. раствора NaOH. Для определения молочной кислоты из каждой пробы отбирают по 1,5 мл раствора и вносят в пробирки, содержащие по 1,5 мл 5%-ного раствора СС13СООН или 1,5 мл 0,5 н. раствора НС104. В безбелковом растроре определяют содержание глюкозы и молочной кислоты.

Количество глюкозы в опытных пробах рассчитывают по калибровочному графику. Ввиду того что сернокислый цинк и щелочь частич

страница 26
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
в каком случае трудовой договор не может быть расторгнут работодателем
Royal London Chronograph 41327-02
курсы маникюра и наращивания ногтей в сзао
сколько длится обучение топ менеджмента

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(07.12.2016)