химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

ора агара на насыщенном КС1, Внутренний диаметр агарового мостика — 2 мм; высота агарового столбика — 1,5 см. Делительная воронка изолирована от света. В нерабочем состоянии агаровый сифон погружают в раствор KCI.

Проверка прибора. Для измерения дыхания необходимо установить, при каком потенциале на электроде достигается ток насыщения. Значение потенциала может отличаться от теоретического в зависимости от омического сопротивления ячейки, хлорсеребряного электрода и т. д. Рабочее значение потенциала составляет 700 мВ.

После выбора значения потенциала платинового электрода необходимо проверить работу полярографа с использованием объекта, поглощающего кислород. Для этой цели удобно пользоваться густой суспензией пекарских дрожжей, дважды промытых водопроводной водой и суспендированных в 0,9%-ном растворе КС1 с добавлением 1%-ной глюкозы. Изменение тока в цепи при добавлении дрожжей в ячейку изображено на рис. 63.

t

Рис. 63. Поглощение кислорода в суспензии дрожжей в ячейке полярографа, заполненной 0,9i% КС1, содержащим 1%-ную глюкозу

Для измерения скорости дыхания определяют цену деления прибора-регистратора в концентрационных единицах растворенного кислорода. Принимают, что при комнатной температуре и атмосферном давлении растворимость кислорода в обычно использующихся средах инкубации равна 2,5-10~4 М. Скорость дыхания обычно выражают в мкг-атомах поглощенного за 1 мин кислорода, отнесенных к 1 мг белка использованного препарата.

ЛИТЕРАТУРА

1. Ум брей т В. В. и др. Манометрические методы тканевого обмена. М., 1951.

2. Кондратов Г. И. Ингибирование сукцинатоксидазной системы митохондрий щавелевоуксусной кислотой. Рукопись дипл. работы, хранящейся на кафедре биохимии биологического ф-та МГУ. М., 1967.

3. В и н о г р а д о в а Е. Н. и др. Методы полярографического и амперометрического анализа. М., 1963.

4. Методы практической биохимии/Под ред. Б. Уильямса и К. Уилсона. М., 1978.

2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ БЕЛКА МИТОХОНДРИЙ И СУБМИТОХОНДРИАЛЬНЫХ ЧАСТИЦ С БИУРЕТОВЫМ РЕАКТИВОМ

Так как мембранные образования клетки характеризуются высоким содержанием липидов, для растворения белка используют 2 н. раствор КОН, содержащий 1%-ный дезоксихолат.

К U,Ut> мл густой суспензии митохондрий или препарата Кейлина— Хартри добавляют 0,95 мл 2 и. КОН и 10 мг дезоксихолата. После полного растворения белка (до исчезновения мути) добавляют 4 мл стандартного биуретового реактива (с. 80), тщательно перемешивают и оставляют на 30 мин при комнатной температуре. Одновременно готовят контрольную пробу (2 мл 2 н. КОН, 20 мг дезоксихолата, 8 мл биуретового реактива). Колориметрируют при 540 нм в кюветах толщиной 10 мм. Содержание белка находят по заранее построенной калибровочной кривой (сывороточный альбумин в концентрации от 1 до 10 мг/мл).

ЛИТЕРАТУРА

G о г п a 11 A. G., В а г d a w i 11 С. J., D a v i d М. М. Determination of serum proteins by means of the biuret reaction//J. Biol. Chem. 1949. Vol. 177. P. 751.

3. ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ РАСТВОРОВ МАГНИЯ И КАЛЬЦИЯ МЕТОДОМ КОМПЛЕКСОНОМЕТРИЧЕСКОГО ТИТРОВАНИЯ

Во время титрования при рН 10 в точке эквивалентности происходит переход красного металлокомплекса индикатора в свободный,

В щелочной среде (рН>10) ЭДТА образует с Mg2+ и Са2+ очень устойчивые комплексы: логарифм константы устойчивости для комплекса с Mg2+ при 20° С и /=0Д равен 8,7, а для комплекса с Са2+ — 10,7. В щелочной среде растворы Mg2+ и Са2+ можно титровать раствором ЭДТА, при этом вблизи точки эквивалентности наблюдается резкий скачок концентрации ионов металла, подобно тому как при титровании сильной кислоты сильным основанием вблизи точки эквивалентности наблюдается резкий скачок концентрации ионов водорода. Конец титрования устанавливают с помощью металлохромных индикаторов. Они образуют комплексы с Mg2+ или Са2+, причем образование комплекса (или его распад) сопровождается изменением окраски индикаторов. При добавлении ЭДТА к раствору, содержащему один из катионов и соответствующий индикатор, происходит вытеснение индикатора из комплекса с металлом и образуется комплекс металла с ЭДТА. Комплекс металла с индикатором окрашен иначе, чем свободный индикатор, в результате при связывании всего металла в комплекс с ЭДТА происходит изменение окраски раствора. Индикатор подбирают таким образом, чтобы переход окраски наблюдался в зоне резкого изменения концентрации катиона, наступающего вблизи точки эквивалентности при титровании ЭДТА. Для титрования раствора Mg2+ используют азокраситель эриохром черный Т:

окрашенный в синий цвет зриохром черный Т. Для титрования Са2+ используют аммонийную соль пурпуровой кислоты — мурексид (можно использовать также и эриохром черный Т).

о о

о о II II

с с=

\н-< С NH I

V /

С N1

j Ц О- . • ;М: • • -б

<у о

Во время титрования при рН>11 происходит переход красного ме-таллокомплекса мурексида в свободный мурексид сине-фиолетового цвета.

Концентрация титруемых металлов обычно составляет Ю-4—10~2М. Определение концентрации Mg2+

Реактивы:

1.

страница 250
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
курсы по ремонту холодильного оборудования в тюмени
Стул B-trade JY-987
раскладушка надин купить
курсы по парикмахерскому делу москва

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(04.12.2016)