химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

em. 1980. Vol. 255. P. 267.

8. Hi Here d L., Muchiri P. M., Nordenbrand K. et al. Mn2+ prevents the Ca2+-induced inhibition of ATP synthesis in brain mitochondria//FEBS Lett. 1983. Vol. 154. P. 247.

8. КРЕАТИН КИНАЗНАЯ АКТИВНОСТЬ МИТОХОНДРИЙ СЕРДЕЧНОЙ МЫШЦЫ

Ткани, имеющие большой динамический диапазон энергетического обмена (скелетная и сердечная мышцы), а также мозг содержат креатинкиназу (с. 291). Во внутренней мембране митохондрий скелетных мышц, сердца и мозга содержится креатинкиназа, отличная по элект-рофоретической подвижности и термолабильности от трех изоферментов креатинкиназы цитоплазмы. Активность креатинкиназы в митохондриях достаточна для того, чтобы в присутствии избытка креатина обеспечить превращение всего образующегося в процессе окислительного фосфорилирования АТФ в креатинфосфат. Освобождающийся при этом АДФ вновь фосфорилируется в митохондриях. Таким образом,, высокая активность креатинкиназы в митохондриях может поддерживать работу дыхательной цепи на постоянно высоком уровне в тканях, лишь периодически испытывающих потребность в большом количестве АТФ.

Изучение кинетических параметров, а также условий протекания креатинкиназной реакции в митохондриях привело к предположению о том, что митохондриальный изозим катализирует прямую реакцию;

АТФ + креатин-»-АДФ + креатинфосфат.

Было также высказано предположение о том, что именно креатинфосфат является той формой высокоэргического фосфата, которая переносится из митохондрий в другие части клетки. В настоящей работе предлагается ознакомиться с влиянием креатина на дыхание митохондрий сердца и определить 50,5 митохондриальной креатинкиназы для креатина и АТФ.

Реактивы:

1. Реактивы для выделения митохондрий сердца (с. 405).

2. Среди инкубации: 0,3 М сахароза, 10 мМ КС1, 3 мМ MgCl2 (концентрацию исходного раствора MgCI2 определяют титрованием ЭДТА с эриохромовым черным Т) (с. 484), 5 мМ КН2Р04 (рН 7,4), 20 мМ трис-HCl, рН 7,4, 5 мМ сукцинат калия, 2,5 мкМ ротенон (раствор готовят на перегнанном этиловом спирте), креатин (от 0 до 20 мМ).

3. АДФ — 0,03 М раствор, рН 7,4.

4. АТФ — 5 мМ раствор, рН 7,4.

5. 2,4-динитрофенол — 0,01 М pacfBop, рН 7,4.

Выделяют митохондрии сердца (с. 405). В первой серии опытов в кювету полярографа (с. 480) помещают 2 мл среды инкубации, погружают электроды и устанавливают перо самописца в крайнее положение шкалы. Реакцию начинают добавлением 0,04 мл суспензии митохондрий (2—3 мг белка). Через 2 мин в кювету добавляют 300 мкМ АДФ.

После выхода митохондрий в контролируемое состояние делают повторную добавку АДФ. Проводят аналогичные записи с пробами, содержащими 2,5, 5, 10, 15 и 20 мМ креатина.

Во второй серии опытов регистрируют ответ митохондрий на последовательное добавление шести добавок АТФ по 50 мкМ в отсутст-держащими 2,5, 5, 10, 15 и 20 мМ креатин.

Для всех проб рассчитывают скорости потребления кислорода в различных состояниях, величины дыхательного контроля и АДФ/О. Строят графическую зависимость скорости дыхания в состоянии 4 от концентрации креатина в пробе (по результатам первой серии опытов) и зависимость скорости дыхания от концентрации АТФ в отсутствие креатина и в присутствии 10 или 20 мМ креатина (по результатам второй серии опытов). Находят значения 50,5 для креатина и АТФ.

ЛИТЕРАТУРА

1. Jacobus W. S., Lehninger A. L. Creatine kinase of rat heart mitochondria// //J. Biol. Chem. 1973. Vol. 248. P. 4803.

2. Vial C, Godinot C, Gautheron D. Membranes creatine kinase in pig heart mitochondria. Properties and role in phosphate potential regulation//Biochemie. 1972. Vol. 54. P. 843.

VII. НЕКОТОРЫЕ МЕТОДЫ, ПРИМЕНЯЕМЫЕ ПРИ ИЗУЧЕНИИ МЕТАБОЛИЗМА МИТОХОНДРИЙ

1. ПОЛЯРОГРАФИЧЕСКИЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОГЛОЩЕНИЯ КИСЛОРОДА

Одним из основных параметров, характеризующих обмен выделенных митохондрий, является их способность к поглощению кислорода и зависимость скорости дыхания от присутствия акцепторной системы (АДФ + Фн) (см. также с. 462). В связи с этим для изучения метаболизма митохондрий необходимо иметь метод, позволяющий точно измерить поглощение кислорода при окислении митохондриями тех или иных субстратов.

Хорошо известным и широко распространенным способом измерения дыхания является манометрический метод Варбурга. Однако этот метод имеет ряд недостатков. К числу наиболее существенных относятся: длительное время предварительной инкубации, необходимое для выравнивания тмпературы (10—15 мин), трудность автоматической регистрации. В связи с этим область применения манометрического метода ограничена, и для изучения быстрой динамики дыхания аппарата Варбурга оказывается непригодным.

Чрезвычайно плодотворным оказалось применение для этих целей полярографического метода измерения концентрации кислорода с использованием стационарных твердых электродов.

Полярографический метод основан на электрохимической реакции восстановления растворенного кислорода до перекиси водорода и воды:

02 + 2ё + 2Н+->Н202,

02 + 4е + 4Н+^2Н20.

Рис. 62. Принципиальная электрическая

страница 248
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
турбо наклейки
buderus opentherm cr12004 нужен или нет опыт использования
алексей брянцев концерты в 2017 году в москве
сетка сварная оцинкованная полимерным покрытием

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(25.01.2017)