химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

ю в кювету, содержащую митохондрии и сукцинат, последовательно добавляют небольшие количества Са2+ (по 50—100 мкМ) и регистрируют кратковременную активацию дыхания, сменяющуюся переходом в контролируемое состояние (замедление дыхания вследствие поглощения добавленного Са2+). Добавление Са2+ прекращают, когда очередная порция Са2+ приводит к развивающейся во времени спонтанной активации дыхания.

Для изучения ингибирующего действия Са2+ на процесс окислительного фосфорилирования к инкубируемым в присутствии сукцината митохондриям добавляют различные (увеличивающиеся в каждой следующей пробе) количества Са2+. После аккумуляции катиона и перехода в контролируемое состояние в пробы добавляют 200 мкМ АДФ и регистрируют скорость окислительного фосфорилирования в нагруженных Са2+ митохондриях. В специальных опытах убеждаются в том, что накопление Са2+ не приводит к уменьшению сукцинатоксидазной активности митохондрий. С этой целью к инкубируемым в среде с сук-цинатом и нагруженным различными количествами Са2+ митохондриям добавляют 50 мкМ ДНФ и регистрируют дыхание до полного исчерпания кислорода.

Присутствие Са2+ в окружающей среде не влияет на процесс окислительного фосфорилирования. В этом убеждает следующий опыт. К митохондриям, инкубируемым в среде с сукцинатом, добавляют Ю-7 М рутениевый красный. Из-за инактивации системы транспорта Са2+ последующее добавление катиона не вызывает обратимой активации дыхания. Добавление АДФ в таких условиях (весь добавленный Са2+ остается в среде инкубации) приводит к активации дыхания, степень которой не отличается от контроля (сравни с первой пробой).

На основании проведенных измерений строят графическую зависимость скорости дыхания митохондрий в присутствии ДНФ и АДФ, скорости окислительного фосфорилирования и коэффициентов АДР/О и ДК от количества предварительно накопленного Са2+ в матриксе митохондрий. Если вследствие ограниченной емкости препарата митохондрий для Са2+ степень торможения окислительного фосфорилирования невелика, то для проведения этих опытов можно рекомендовать увеличение концентрации, Mg2+, увеличение рН среды (до ~7,8), увеличение буферной емкости среды или добавление в срду инкубации 50— 100 мкМ ионола (антиоксидант). Каждая из перечисленных модификаций предотвращает спонтанную активацию дыхания в нагруженных Са2+ митохондриях.

Для более углубленного изучения рассматриваемого явления предлагается провести следующие самостоятельные исследования:

1. Изучить влияние накопленного в матриксе Са2+ на кинетику гидролиза АТФ в митохондриях. Процесс гидролиза АТФ в митохондриях регистрируют рН-метрическим методом (с. 475). При проведении этого исследования следует иметь в виду, что процесс аккумуляции Са2+ в митохондриях может протекать в отсутствие субстратов дыхательной цепи (а также в анаэробных условиях) за счет энергии, освобождающейся в процессе гидролиза АТФ. Кроме того, прочносопря-женные митохондрии в таких условиях катализируют гидролиз АТФ с .очень низкой скоростью. В связи с этим в предварительных экспериментах измеряют зависимость скорости гидролиза АТФ в митохондриях от концентрации разобщителя (ДНФ). В дальнейшем измерения скорости гидролиза АТФ в предварительно нагруженных Са2+ митохондриях проводятся после добавления насыщающих концентраций ДНФ. Чтобы исключить возможность быстрого выхода Са2+ из мат-рикса под действием ДНФ (проверяют в специальных опытах), добавлению разобщителя должна предшествовать обработка нагруженных Са2+ митохондрий 10~7 М рутениевым красным. Результаты исследования представляют в виде графической зависимости скорости ДНФ-ин-дуцируемого гидролиза АТФ от количества Са2+ в матриксе митохондрий.

2. Сравнить действие Са2+ и других проникающих двухвалентных катионов (Sr2+, Мп2+, Ва2+) на процесс окислительного фосфорилирования и гидролиза АТФ в митохондриях.

3. Продемонстрировать обратимость (или необратимость) вызванных накоплением Са2+ в матриксе изменений скорости АТФ-синтетаз-ной и АТФ-гидролазной реакций. Для проведения этого исследования следует воспользоваться ионофором А23187, катализирующим электронейтральный Са2+/2Н+-обмен через мембрану. Обработка нагруженных Са2+ митохондрий ионофором А23187 в присутствии избытка ЭГТА в среде приведет к быстрому выходу Са2+ из матрикса.

4. Лейкин Ю. Н., Виноградов А. Д. Взаимоотношение процессов окислительного фосфорилирования и транспорта ионов Са2+ в митохондриях//Укр. биохим. журн. 1971. Т. 43, № 1. С. 88.

5. Gomez-Puyou A., Gomez-Puyou М. Т., Klapp М. et al. Effect of calcium on the translocation of adenine nucleotides in rat liver mitochondria//Arch. Biochem. Biophys. 1979. Vol. 194. P. 399.

6. Vi 11 a 1 оb о A., Lehninger A. L. Inhibition of oxidative phosphorylation in ascites tumor mitochondria and cells by intramitochondrial Ca2+//J. Biol. Chem. 1980. Vol. 255. P. 2457.

7. Yamada E. W., Shiffman F. H., Huzel N. J. Ca2+-regulated release of an ATPase inhibitor protein from submitochondrial particles derived from skeletal muscle of the rat//J. Biol. Ch

страница 247
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
мебель полигон
гироскутер smart balance умка
гост на наклейки категорий помещений по пожарной опасности
ограждения для производства работ размеры

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(29.05.2017)