химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

нию митохондрий, подготавливают аппарат Варбурга к работе. Для этого заполняют дополнительный резервуар сосудиков нарезанной фильтровальной бумагой и смачивают ее в 0,3 мл 10%-ного раствора КОН для поглощения С02. Заполняют основное пространство сосудиковой средой инкубации по схеме:

№ сосудика Солевая смесь, мл Раствор субстрата, мл Раствор АТФ, мл

1-3 0,6 0,4 (сукцинат) 0,4

4—6 0,6 0,4 (кетоглутарат) 0,4

7—9 0,6 0,4 (аскорбат) 0,4

Пробы 3, 6, 9 служат контролем и их не инкубируют в аппарате Варбурга. Доводят температуру в термостате до 26° С. Готовят раствор гексокиназы на 0,5 М глюкозе, исходя из расчета 0,5—1 мг гексокиназы на пробу (необходимое количество гексокиназы находят в предварительных опытах). Выделяют митохондрии из исследуемой ткани (с. 403). Во все сосудики разливают по 0,2 мл раствора гексокиназы в глюкозе и по 0,4 мл суспензии митохондрий, быстро притирают сосудики к манометрам и помещают их в термостат аппарата Варбурга. Включают качающий механизм и через 10 мин, в течение которых происходит выравнивание температуры, подводят жидкость в обоих коленах манометра до одного уровня (150—250), закрывают краны и приступают к определению поглощения кислорода.

Снятие показаний манометра и расчет количества потребленного кислорода см. на с. 18. Показания манометров снимают через каждые 10 мин, при общем времени инкубации 30 мин. После окончания срока инкубации реакцию останавливают добавлением во все сосудики по 2 мл холодной 5%-ной трихлоруксусной кислоты. В контрольные пробы кислоту добавляют перед разливанием суспензии митохондрий. Все пробы фильтруют и из фильтрата отбирают равные объемы на определение неорганического фосфата. Количество эстерифицированного фосфата определяют по разности между опытными и контрольными пробами. Рассчитывают коэффициент фосфорилирования Р/О. Полученные результаты оформляют в виде таблицы.

1. Мешкова Н. П., Северин С. Е. Практикум по биохимии животных. М., 1950.

2. Ленинджер А. Митохондрия. М., 1968.

3. Скулачев В. П. Соотношения окисления и фосфорилирования в дыхательной цепи. М., 1961.

4. ВЛИЯНИЕ РАЗОБЩИТЕЛЕЙ НА ПРОЦЕССЫ ТРАНСФОРМАЦИИ ЭНЕРГИИ В МИТОХОНДРИЯХ

Энергия, освобождающаяся в процессе переноса электронов в митохондриях, трансформируется в электрохимический градиент ионов

Н+ протондвижущая сила) и расходуется для протекания различных эндергонических реакций.

К числу наиболее хорошо охарактеризованных эндергонических реакций митохондрий относятся наряду с окислительным фосфорили-рованием АДФ восстановление НАД+ сукцинатом, трансгидрогеназная реакция и перенос ионов Са2+ против концентрационного градиента. Изучение кинетических взаимоотношений таких реакций при их одновременном протекании важно не только для понимания механизмов регуляции метаболизма митохондрий в целом, но и для выяснения механизмов, лежащих в основе любого из "путей трансформации энергии в митохондриях.

При одновременном добавлении АДФ и Са2+ в аэробную суспензию энергизованных митохондрий окислительное фосфорилирование не происходит до тех пор, пока весь добавленный Са2+ не поглотится внутрь митохондрий. Это свидетельствует об отсутствии простой конкуренции между процессами и не может быть удовлетворительно объяснено различиями кинетических параметров исследуемых эндергонических реакций. Ясное понимание таких взаимоотношений может быть получено при анализе энергетического состояния митохондрий (величины трансмембранного потенциала) при их взаимодействии с АДФ и ионами Са2+.

В работе предлагается сравнить действие разобщителей на процессы окислительного фосфорилирования и активного транспорта Са2+ в митохондриях печени крысы. Так как протекание обеих эндергонических реакций сопряжено с поглощением (синтез АТФ) или освобождением (транспорт Са2+) стехиометрических количеств ионов Н+, следует воспользоваться установкой для непрерывной регистрации рН стеклянным Нечувствительным электродом (с. 474). Изменения трансмембранного потенциала прослеживают по распределению К+ (в присутствии валиномицина в бескалиевой среде — с. 442) с помощью Нечувствительного электрода или по абсорбции проникающих синтетических катионов (например, сафранин, оксанол и др.) с помощью двух-волновой спектрофотометрии.

Реактивы и оборудование:

1. Реактивы для выделения митохондрий печени крысы (с. 406).

2. Среда инкубации, содержащая 0,15 М сахарозу, 75 мМ К.С1, 2,5 мМ MgC!2, 5 мМ КН2Р04, рН 7,4 — 50 мл.

3. Сукцинат калия — 1 М раствор, рН 7,4.

4. АДФ — 2- Ю-2 М раствор, рН 7,4.

5. 2,4-динитрофенол — 10~2 М раствор, рН 7,4.

6. СаС12 — 5-Ю-2, 4-Ю"2, 3-Ю-2, 2-10~2 и Ы0-2 М растворы, го; товят разведением титрованного раствора СаСЬ (с. 484),

/. котенон — D- М раствор в перегнанном этаноле.

8. НС1 и КОН — 1Сг-2 М растворы, готовят разведением титрованных растворов НС1 и КОН.

9. Регистрирующий рН-метр и полярограф с набором кювет и микропипеток. Объем 10—20 мкл (6—8 штук) и 40—60 мкл {1 шт.).

В первой части работы изучают влияние разобщителя на сукцинаток

страница 242
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
ремонт холодильников рязанский проспект
зарядка моноколеса
http://www.kinash.ru/etrade/goods/4404/city/Omsk.html
билеты на спектакль комедия ошибок

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(23.08.2017)