химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

(серия 1), 100 мкМ ЭГТА и 5 мкМ А23187 (серия 2) и Ю-7 М рутениевый красный (серия 3). Параметры окислительного фосфорилирования рассчитывают и сравнивают с результатами проведенных ранее опытов.

Проводят спетрофотометрические измерения концентрации примесного (загрязнение реактивов) Са2+ в среде инкубации с подходящим металлохромным индикатором. Анализируют причины отклонения от линейности зависимости скорости исследуемого процесса от концентрации белка митохондрий.

В качестве дополнительного задания можно предложить следующий опыт. Измеряют параметры окислительного фосфорилирования с использованием небольшого количества митохондрий в пробе (около 0,5 мг белка). Оценивают концентрацию примесного Са2+ в среде инкубации. Измерения с большими концентрациями белка проводят в среде, дополненной пропорционально возрастающей концентрацией Ca2-f" (добавляют порции заранее приготовленного титрованного раствора СаС12).

Настоящая работа может проводиться с помощью рН-метрической регистрации защелачивания среды в процессе окислительного фосфорилирования в соответствии с уравнением: АДфЗ-+НР042-+Н+ч^АТФ4 + Н20 (с. 475).

В этом случае для калибровки шкалы должны быть использованы заранее приготовленные титрованные растворы Ю-2 М НС1 или КОН.

Примечание. При выборе концентрации ЭГТА в этих опытах студент должен руководствоваться значением /Сд комплекса Са-ЭГТА в используемых условиях, сродством Са2+-транспортирующей системы митохондрий для Са2+ и содержанием эндогенного и примесного Са2+ в системе.

ЛИТЕРАТУРА

1. Chance В., Williams G. R. Respiratory enzyme in oxidative phosphorylation. I. Kinetics of oxygen utilisation//! Biol. Chem. 1955. Vol. 217. P. 383.

2. Лейкин Ю. H., Виноградов А. Д. Взаимоотношение процессов окислительного фосфорилирования и транспорта ионов Саа+в митохондриях//Укр. биохим. журн. 1971. Т. 43, № 1. С. 88.

assesment of the 1984. Vol. 218.

Reinhart P. N.. Van De Pol E., Taylor W. M. et a 1. An calcium content of rat liver mitochondria in vivo//Biochem, J. P. 418.

Biol. Chem.

Reed P. W„ Lardy H. A, A23187: a divalent cation ionophore//J. 1972. Vol. 247. P. 6970.

Nicholls D. G The regulation of extramitichondrial calcium ion concentration bv rat liver mitochondria//Biochem. J. 1978. Vol. 176. P. 463.

3. ОКИСЛИТЕЛЬНОЕ ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ С РАЗЛИЧНЫМИ СУБСТРАТАМИ

Современные представления о пунктах сопряжения реакций переноса электронов в дыхательной цепи митохондрий с аккумуляцией энергии могут быть суммированы в виде простой схемы (рис. 59). Из нее видно, что максимальное теоретически возможное количество молекул АТФ, образующихся при переносе пары электронов от субстрааскороат

« НАДН—> ФЩ—*- Fe»S I АТФ

KoQ —? цит. Ъ

АТФ

/ к

сукцинат —^ ФП2 —** Fe»S

ЦИТ. С]

I

ТМФД

\

цит.с цит. аа-> ?

I

АТФ

Рис. 59. Локализация пунктов сопряжения в дыхательной цепи

та окисления к кислороду, зависит от природы окисляемого субстрата. Для окисления НАДН это число равно 3, для сукцината — 2, а для окисления восстановленного цитохрома с—1. В случае окисления а-кетоглутаровой кислоты обычно наблюдается образование четырех молекул АТФ. Последнее обстоятельство связано с существованием субстратного фосфорилирования, не требующего переноса электронов по дыхательной цепи. Величиной, характеризующей эффективность окислительного фосфорилирования, служит коэффициент фосфорилирования Р/О, т. е. отношение числа г-атомов эстерифицировэнного неорганического фосфата к числу г-атомов потребленного кислорода.

Определив потребление митохондриями неорганического фосфата и кислорода в аппарате Варбурга (с. 10), рассчитывают коэффициент фосфорилирования. Так как для достоверного определения кислорода и неорганического фосфата необходима довольно продолжительная инкубация митохондрий, в реакционную смесь обычно вносят АДФ-реге-нерирующую систему (чаще всего для этой цели используют гексоки-назу с глюкозой). Это удобно также потому, что гексокиназа успешно конкурирует с митохондриальными АТФ-азными реакциями, которые могут сильно искажать результаты опытов, гидролизуя образующийся в ходе фосфорилирования АТФ.

Задача настоящей работы состоит в определении коэффициента фосфорилирования при окислении митохондриями различных субстратов.

1. Реактивы для выделения митохондрий (с. 405).

2. Раствор солевой смеси: 0,066 М фосфат калия (рН 7,4), 0,33 М КС1, 0,016 М MgCl2 (концентрацию раствора До^С12~определя-ют титрованием ЭДТА с эриохромом черным Т — с. 484).

3. Глюкоза — 0,5 М раствор.

4. Гексокиназа кристаллическая.

5. Сукцинат калия — 0,1 М раствор, рН 7,4.

6. а-Кетоглутарат калия — 0,1 М раствор, рН 7,4.

7. Аскорбат калия — 0,05 М раствор (рН 7,4), содержащий тет-раметил-я-фенилендиамин (ТМФД) — 0,005 М раствор.

8. АТФ — 0,0075 М раствор, рН 7,4.

9. Трихлоруксусная кислота — 5%-ный раствор.

10. КОН — 10%-ный раствор.

11. Реактивы для определения фосфата (с. 34).

Предварительно определяют константы сосудов (с. 12). В день опыта, прежде чем приступить к выделе

страница 241
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
банер с датой открытия
гостиницы на спортивной набережной владивосток
вставка вентиляционная гибкая типа в ф 280 мм цена
заказать автобус для перевозки школьников недорого

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(17.12.2017)