химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

рая бумаги не должны заходить друг на друга) и помещают в кювету с растворителем, стоящую на дне хрома-тографической камеры (см. рис. 17, А, с. 128). Для насыщения камеры растворитель наливают в кювету накануне. Через 16—18 ч после помещения хроматограммы в камеру, когда растворитель будет на уровне 5—10 см от верхнего края бумаги, хроматограмму вынимают, сушат под тягой на воздухе и ставят для повторной разгонки (хорошие результаты получают после четырехразовой разгонки).

Проявление хроматограммы. Высушенную хроматограмму осторожно опрыскивают сначала 0,1%-ным раствором FeCl3-6H20, приготовленным на 80%-ном этиловом спирте, подсушивают на воздухе при комнатной температуре и затем опрыскивают 1%-ным раствором суль-фосалициловой кислоты. После высушивания ясно видны белые пятна фосфорных эфиров углеводов на розово-лиловом фоне хроматограммы.

Реакция взаимодействия Fe3+ с сульфосалициловой кислотой и соответственно образование цветного фона хроматограммы зависят от рН. При рН 1,5—2,5 окраска фона розовая. При более кислой реакции "окраски не образуется, при более щелочной — окраска оранжево-желтая и обнаружение пятен на таком фоне затруднено.

На хроматограмме фосфорные эфиры углеводов располагаются в следующем порядке (снизу вверх): фруктозодифосфат, глюкозо-6-фос-фат, фруктозо-6-фосфат, фосфоглицериновая кислота. Пятна неорганического фосфата располагаются выше пятен фосфорных эфиров углеводов.

Количественное определение. В три точки на хроматограмму наносят исследуемый раствор. В две другие наносят стандартные растворы фосфорных эфиров углеводов. После хроматографического разделения высушенную хроматограмму разрезают так, что на одной половинке находятся: одна точка, в которую был нанесен исследуемый раствор, и точки, куда наносились стандартные растворы. На другой половине — точки, где был исследуемый раствор. Часть хроматограммы со стандартными растворами проявляют, обрабатывая ее хлорным железом и сульфосалициловой кислотой. Сопоставляя две половины хроматограммы — проявленную и непроявленную, находят на непроявленной половине местоположение пятен фосфорных эфиров углеводов. Эти места обводят простым карандашом, затем вырезают, измельчают ножницами, помещают в пробирки, заливают 2 мл 1 н. раствора НС1 и оставляют на 20 ч, закрыв пробирки пробками. После этого из элюата отбирают 1 —1,5 мл и проводят минерализацию (с. 44). После минерализации определяют фосфат по Бартлетту. Содержимое проб количественно переносят в мерные пробирки, нейтрализуют по фенолфталеину (индикатор добавляют в пробы), добавляют 0,5 мл 10 н. H2S04, 0,2 мл 5%-ного раствора молибденовокислого аммония, 0,2 мл раствора эйконогена (основного раствора), доводят водой до 5,0 мл и все быстро перемешивают. Пробирки помещают в кипящую водяную баню точно на 7 мин. Параллельно ставят пробы со стандартными растворами фосфата, содержащие от 0,02 до 0,12 мкмоль фосфора в пробе. После охлаждения пробы колориметрируют при 830 нм.

ЛИТЕРАТУРА

1. Шар л о Г. Методы аналитической химии (количественный анализ неорганических соединений). М., 1969.

2. Молибден и вольфрам//Под ред. Ф. Коттон, Дж. Уилкннсон. Современная неорганическая химия. М, 1969. Т. 3. С 356.

3. Городецкий В. К. Знзиматический метод количественного определения глюкозы в крови с помощью отечественного препарата глкжозооксидазы//Современ-ные методы биохимии. М, 1964. Т. 1. С. 311.

4. Seifter S. et al. The Estimation of Glycogen with the Anirone Reagent//Arch. Biochem. 1950. Vol. 25. P. 191.

5. S о 11 i n g H., Esmann V. A sensitive Method of Glycogen Determination in the Presence of Interfering Substances Utilizing the Filter—Paper Technique//AnalyL Biochem. 1975. Vol. 68. P. 664.

6. В a r k e г J. В., Sumraerson W. H. The colorimetric Determination of Lactic Acid in Biological Material//.!. Biol. Chem. 1941. Vol. 138. P. 535.

7. F i s с k e С. H., Subbarow Y. The colorimetric Determination of Phosphorus// //J. Biol. Chem. 1925. Vol. 66. P 375

8. Roe J. H. A colorimetric Method for the Determination of Fructose in Blood and Urine//J. Biol. Chem. 1934. Vol. 107. P. 15.

9. Wade H. E., Morgan D. M. Detection of Phosphate Esters on Paper Chromato-grams//Nature. 1953. Vol. 171. P. 529.

10. Bartlett G. R. Phosphorus Assay in Column Chromatography//,!. Biol, Chem. 1959. Vol. 234. P. 466.

11. Rumeckles V. C, Krotkov G. The Separation of Phosphate Esters and other Metabolites by Ionophoresis and Chromatography//Arch. Biochem. Biophys. 1957. Vol. 70. P. 442.

12. О 1 s о n J. A. Spectrophotometric Measurement of a—ketoacid semicarbozones// //Arch. Biochem. Biophys. 1959. Vol. 85. P. 225.

13. Sumner I. B. A Method for the colorimetric Determination of Phosphorus//Scien-ce. 1944. Vol. 100. P. 413.

14. Rathbun W. B„ Betlach M. V. Estimation of Enzymatically produced Ortho-phosphate in the Presence of Cystein and Adenosine triphosphate//Anal. Biochenu 1969. Vol. 28. P. 436.

15. Bencini D. A., Wild J. R., О'Donovan G. A. Linear One—Step Assay for the Determination of

страница 24
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
где в симферополе обучают ремонту импортных котлов
монтаж наружной рекламы цена
общество возрождение
Фирма Ренессанс лестница входная - всегда надежно, оперативно и качественно!

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(23.11.2017)