химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

гося малата в спектрофотометрическую кювету вносят 3 мл среды для измерения концентрации малата, добавляют 50 мкМ дихлорфенолиндофенол, 1 мМ фе-назинметосульфат, малатдегидрогеназу — 50 мкг/мл и аспартатамино-трансферазу — 50 мкг/мл. Определяют значение оптической плотности раствора при длине волны 600 нм, соответствующей максимуму поглощения окисленной формы ДХФИФ (емм600 нм=20). В кювету добавляют 50—100 мкл раствора малата и фиксируют уменьшение оптической плотности, связанное с восстановлением дихлорфенолиндофенола. Рекомендуется определить указанным методом концентрацию приготовленного по навеске раствора L-малата. Рассчитывают концентрацию образующегося в результате реакции окисления янтарной кислоты малата и определяют стехиометрическое соотношение окисленного сукцината к образованному малату в отсутствие и в присутствии разобщителя.

ЛИТЕРАТУРА

1. Meijer A. J, Van Dam К. The metabolic significance of anion transport in mitochondria//Biochim. Biophys. Acta. 1974. Vol. 346. P. 213.

2. PalmieriF., Prezioso G., Quagliariello E. Kinetic study of the dicarboxylate carrier in rat liver mitochondria//Europ. J. Biochem. 1971. Vol. 22. P. 66.

3. La Noue K. F., Schoolwerth A. C. Metabolite transport in mitochondria//

//Ann. Rev. Biochem. 1979. Vol. 48. P. 871.

VI. РЕАКЦИИ ТРАНСФОРМАЦИИ ЭНЕРГИИ В МИТОХОНДРИЯХ

1. ПОЛЯРОГРАФИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ СТЕПЕНИ СОПРЯЖЕННОСТИ ПРЕПАРАТА МИТОХОНДРИЙ

Интактные митохондрии, инкубируемые в среде, содержащей субстрат окисления и кислород, характеризуются низкой скоростью дыхания. ина может оыть увеличена в несколько раз дооавлением акцепторов энергии, аккумулирующейся в дыхательной цепи (АДФ + ФН, АДФ + ФН+ глюкоза + гексокиназа). Активация дыхания акцепторами энергии наблюдается только в том случае, если перенос электронов по дыхательной цепи прочно сопряжен с фосфорилированием. При разрушении митохондрий, при добавлении детергентов или разобщителей степень активации дыхания добавленным АДФ уменьшается или исчезает, что связано с нарушением сопряжения. Стимуляция дыхания изолированных митохондрий при добавлении АДФ в присутствии субстрата окисления, фосфата и кислорода носит название «дыхательного контроля» (ДК). Количественная оценка этого явления позволяет получить информацию о степени сопряженности препарата митохондрий, выделенного из различных органов И тканей.

На рис. 58 приведена типичная кривая потребления кислорода митохондриями. Добавление к суспензии субстрата окисления (S) приводит к медленному потреблению кислорода — со скоростью Vf. ВнеS

Рис. 58. Полярографическая регистрация дыхания митохондрий

сение в реакционную смесь АДФ в концентрации [х] в момент времени t\ вызывает немедленную активацию дыхания (скорость потребления кислорода Кз . К моменту времени t2 добавленная АДФ фосфорилиру-ется, полностью превращаясь в АТФ, и дыхание вновь тормозится до уровня 1^4АТФ. В этих условиях потребление кислорода может быть вновь активировано добавлением АДФ или глюкозы с гексокиназой.

Отношение vyVV^* называют коэффициентом дыхательного контроля. Его величина меняется от 1 при полном отсутствии дыхательного контроля до 8—10 в случае прочно сопряженного препарата.

Если известны концентрации добавленной АДФ и количество кислорода, потребленное в состоянии 3, легко рассчитать коэффициент кукг^^иугытуиаапптг Л-Л-Ц \И/ W. ичСНИДНи, 4IU ЧИСЛеННЫв ЗНаЧвНИЯ ЭТОГО

коэффициента должны соответствовать коэффициенту Р/О, характеризующему термодинамическую эффективность окисления различных субстратов. Экспериментально определяемые коэффициенты фосфорилирования обычно меньше или равны: 3 — для окисления малата, 2 — для сукцината и 1 — для аскорбата.

Величина АДФ/Д^ (М/мин-мг белка) соответствует скорости фосфорилирования. Отношение скоростей V/4S/V4AT* характеризует активность АТФ-гидролазных реакций митохондрий, регенерирующих АДФ после его фосфорилирования.

Таким образом, имея экспериментально полученные полярограм--мы для митохондрий, можно провести весьма полную количественную оценку полученного препарата.

Реактивы:

1. Реактивы для выделения митохондрий (с. 404).

2. Среда инкубации митохондрий (готовят из концентрированных основных растворов):

а) печени — 0,15 М сахароза; 0,075 М КО, 0,005 М фосфат

калия, 0,0025 MgCl2, рН 7,4.

б) сердца — 0,3 М сахароза, 0,01 М КО, 0,005 М фосфат калия, 0,001 М ЭДТА, рН 7,4.

в) скелетной мышцы — 0,1 М КО, 0,02 М. фосфат калия,

0,005 MgCl2, рН 7,4.

3. Сукцинат калия — 1 М раствор, рН 7,4. Для митохондрий скелетной мышцы при использовании сукцината в среду инкубации добавляют ротенон в концентрации 2,5• 10~7 М.

4. Смесь: глутамат калия (0,5 М) и малат калия (0,5 М).

5. Аскорбиновая кислота — 0,5 М раствор, рН7,4 (готовят непосредственно перед употреблением).

6. Тетраметил-л-фенилендиамин (ТМФД) — 0,01 М раствор.

7. АДФ — 0,02 М раствор, рН 7,4.

8. 2,4-динитрофенол — 0,01 М раствор, рН 7,4.

9. Реактивы для определения белка (с. 483).

Все растворы гото

страница 239
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
дачный поселок новорижское
фреймлайт профиль купить
прокат музыкального оборудования
курсыпо ремонту котлов

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(27.07.2017)