химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

um//FEBS Lett. 1978. Vol. 93. P. 289.

3. S a r i s N. E. L., Akerman К. E. O. Uptake and release of bivalent cations in mitochondria//Curr. Top. Bioenerg. 1980. Vol. 10. P. 103.

4. Moore C. L. Specific inhibition of mitochondrial Ca2+ transport by ruthenium red// //Biochem. Biophys. Res. Communs. 1971. Vol. 42. P. 298.

6. СПЕЦИФИЧНОСТЬ СИСТЕМЫ ТРАНСПОРТА КАЛЬЦИЯ В МИТОХОНДРИЯХ

Изучение проницаемости внутренней мембраны митохондрий для ионов Са2+ привело к представлению о существовании в митохондриях специфической транспортной системы. Ее активность ингибируется низкими концентрациями рутениевого красного, катионов семейства лантанидов и гексаминокобальта. Транспорт Са2+ специфически ингибируется антителами на митохондриальный гликопротеин, который может быть легко экстрагирован из митохондрий с помощью осмотического шока в присутствии ЭДТА. Иммунологические данные не оставляют сомнений в участии этого гл и копр от ей на (м. м. 33 000 Да) в связывании и (или) переносе Са2+ через мембрану. Система транспорта Са2+ в митохондриях катализирует также зависимое от энергии поглощение других двухвалентных катионов, но ее специфичность падает в ряду: Ca2+>Sr2+>Mn2+>Ba2+. 'Кроме того, эта система может быть ответственна за очень быстрый и чувствительный к рутениевому красному трансмембранный перенос ионов Н+ в митохондриях в специальных условиях.

Интересным свойством этой системы является то, что небольшие количества Са2+ не только резко ускоряют поглощение ионов Мп2+ в митохондриях, но и существенно изменяют ее кинетическое поведение при взаимодействии с Мп2+ в качестве субстрата. Это явление получило новое объяснение после того, как было показано, что Са24 служит не только субстратом рассматриваемой транспортной системы, но и с высокой эффективностью регулирует ее активность.

В настоящей работе предлагается изучить специфичность Са2+-транспортирующей системы митохондрий печени крысы и роль Са2+ в регуляции проницаемости внутренней мембраны для двухвалентных катионов.

Реактивы и оборудование:

1. Реактивы для выделения митохондрий печени крысы (с. 406).

2. Среда инкубации, содержащая 0,15 М сахарозу, 75 мМ КО, 2,5 мМ MgCl2 и 5 мМ КН2Р04, рН 7,4 — 50 мл.

3. Сукцинат калия — 1 М раствор, рН 7,4.

4. Ротенон — 5-Ю-4 М раствор в перегнанном этаноле.

5. Рутениевый красный — 10~5 М раствор.

6. СаС12, SrCI2, МпС12 и ВаС12 — Ю-1 М растворы. Если для приготовления раствора СаС12 используется крайне гигроскопичный гексагидрат СаС12, то концентрацию Са2+ в растворе определяют комплексонометрически титрованием с подходящим метал-лохромным индикатором (с. 484).

7. НО и КОН — Ю-2 М растворы. Готовят разведением титрованных растворов НО и КОН.

8. Регистрирующий рН-метр или полярограф с наборами кювет.

9. Набор автоматических и стеклянных микропипеток объемом 10—20 мкл (8—10 шт.) и 40—60 мкл (1 шт.).

Перед выделением митохондрий и проведением работы из 10"! М растворов двухвалентных катионов готовят серию разведений, которая с учетом имеющегося набора микропипеток обеспечила бы возможность вариации конечных концентраций катионов в среде в диапазоне от 20—30 мкМ до 0,5—1,0 мМ (5—6 разведений).

Так как в процессе активного транспорта катионов происходят активация дыхания и закисление среды инкубации, для выполнения работы может быть использована как полярографическая, так и рН-метрическая техника. Из-за трудностей, которые могут возникнуть при изменении скорости дыхания в присутствии низких концентраций катионов, предпочтение следует отдать рН-метрической технике для регистрации кинетики транспортного процесса.

В кювету рН-метра со средой, содержащей 10 мМ сукцинат и 5 мкМ ротенон, в которую погружены электроды, добавляют порцию митохондрий (3—4 мг белка) и регистрируют стационарную концентрацию ионов Н+. Через 1 мин (когда вызванные добавлением митохондрий изменения рН среды прекратятся) в кювету добавляют 20 мкМ Са2+ и регистрируют закисление среды до нового стационарного значения рН. После этого в кювету добавляют 1—2 раза 50— 100 мкМ НО или КОН для калибровки шкалы. Проводят серию аналогичных проб с последовательно возрастающей концентрацией Са2-1" (5—6 проб с концентрацией Са2+ в диапазоне от 20 до 200 мкМ). В пробе с максимальной концентрацией Са2+ убеждаются в том, что скорость вызванного его добавлением закисления среды не совпадает со скоростью ответа электродов на добавление НС1 или КОН. В противном случае следует уменьшить концентрацию белка митохондрий во всех пробах. Проводят три серии аналогичных опытов, в которых измеряют концентрационную зависимость скорости активного транспорта Sr2+, Мп2+ и Ва2+ в митохондриях в тех же условиях. Количественно оценивают специфичность исследуемого процесса в отношении двухвалентных катионов.

Во второй части работы проводят четыре серии таких же опытов, однако перед измерением соответствующей активности митохондрии предварительно «нагружают» небольшим количеством Са2+ (10— 20 нмоль Са2+/мг белка). Вновь оценивают специфичность исследуемой транспортно

страница 234
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
курсы xl в свао
домашний кинотеатр заказать
авторемонт кузова без покраски челябинск
купить мусорный бак в подольске

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(07.12.2016)