химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

бу) удобно пользоваться методом, предложенным Бартлеттом (с. 48).

16. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФОСФОРНЫХ ЭФИРОВ УГЛЕВОДОВ ПОСЛЕ РАЗДЕЛЕНИЯ МЕТОДОМ БУМАЖНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Хроматография — метод разделения газов, паров, жидкостей и растворенных веществ на границе двух фаз—подвижной и неподвижной. Хроматография на бумаге (бумажная хроматография)—один из видов распределительной хроматографии. Метод основан на различии коэффициентов распределения разделяемых веществ между двумя мало-смешивающимися растворителями. В качестве носителя неподвижной фазы используют специальную хроматотрафическую бумагу. Она должна быть химически чистой, однородной по плотности и обеспечивать определенную скорость движения растворителя.

Исследуемое вещество, находящееся в растворе, наносят в виде капель на некотором расстоянии от края (линия старта) на лист хро-матографической бумаги. Бумагу помещают в герметически закрытую камеру и погружают край листа, у которого был нанесен исследуемый раствор, в кювету, содержащую органический растворитель (с. 128, рис. 17, Л).. Линия старта с нанесенными на нее пробами не должна погружаться в растворитель.

В силу капиллярности органический растворитель будет передвигаться по листу хроматографической бумаги. Нанесенное на бумагу вещество движется с током растворителя. Степень сорбции исследуемого вещества^на гидратированных волокнах бумаги (воздушно-сухие листы фильтровальной бумаги в камере, насыщенной парами водона-сыщенного органического растворителя, содержат до 20% воды) определяет скорость его передвижения. Вещества, хуже сорбирующиеся на гидратированных волокнах бумаги, будут передвигаться быстрее. После прохождения фронтом растворителя определенного расстояния бумагу высушивают и обрабатывают тем или иным проявителем. Параллельно с опытным раствором на тот же лист бумаги наносят стандартный раствор исследуемого вещества (свидетель), который будет указывать местоположение определяемого вещества. Для идентификации вещества можно также пользоваться величиной Rf, которая является отношением расстояния, пройденного данным веществом, к расстоянию, пройденному фронтом растворителя. Величина Rf зависит от растворителя и качества бумаги. Различают восходящую (растворитель поднимается по бумаге вверх) и нисходящую (растворитель движется по бумаге вниз) хроматографию.

Хроматографическое разделение фосфорных эфиров углеводов (восходящая хроматография)

Фосфорные эфиры углеводов разделяют с помощью бумажной хроматографии в системе пропиловый спирт — муравьиная кислота. Для* определения положения фосфорных эфиров углеводов на бумажных хроматограммах используют метод, предложенный Ваде и Морганом. Хроматограмму обрабатывают сначала раствором хлорного железа, в результате чего фосфорные эфиры фиксируют ионы железа Fe3+, затем сульфосалициловой кислотой, образующей окрашенное комплексное соединение только со свободными ионами Fe9*. Таким образом, в местах нахождения фосфорных эфиров образуются белые пятна. Количественный метод сводится к определению фосфора после минерализации элюата, полученного из того места хроматограммы (не проявленной), тде было зафиксировано положение эфира углевода.

Реактивы:

1. Хроматографическая бумага.

2. Пропиловый спирт (перегнанный).

3. Муравьиная кислота — 80%-ный раствор.

4. FeCl3-6H20 — 0,1%-ный раствор (на 80%-ном этиловом спирте-(свежеприготовленный).

5. Сульфосалициловая кислота—1%-ный раствор на 80%-ном-этиловом спирте (свежеприготовленный).

6. Глюкозо-6-фосфат — натриевая соль.

7. Фруктозо-6-фосфат — натриевая соль.

8. Фруктозо-1,6-дифосфат — бариевая соль (с. 43).

9. Фосфоглицериновая кислота — бариевая соль (с. 43).

10. НС1—1 н. раствор.

11. H2SO4—10 н. раствор.

12. NaOH—1 н. раствор.

13. Молибденовокислый аммоний — 5%-ный раствор.

14. Эйконоген — основной раствор, приготовление см. на с. 34.

15. Стандартный раствор фосфата КН2РО4, содержащий 0,2 мкмоль фосфата в 1 мл.

16 Na2S04—10%-ный раствор.

17. Фенолфталеин — 0,5%-ный раствор на этиловом спирте.

:} Подготовка хроматограммы. Для хроматографии применяется бу-/мага типа «ленинградская медленная», разрезанная на полосы длиной в 40 см в направлении, перпендикулярном направлению волокон. Ширина полос определяется количеством наносимых проб и размером камеры.

На расстоянии 5—7 см от края простым карандашом проводят черту (линия старта), на которой на расстоянии 3 см от краев и с интервалом в 2,5—3 см помечают точки, куда наносят растворы, подлежащие хроматотрафированию. В каждую точку (диаметр пятна 3— 5 мм) в несколько приемов наносят 0,01—0,02 мл раствора, содержащего 0,2—0,3 мкмоль фосфорного эфира углеводов. Для разделения смеси фосфорных эфиров углеводов (фруктозо- и глкжозо-6-фосфата, фруктозодифосфата, фосфоглюконовой кислоты) используют кислый растворитель, содержащий перегнанный пропиловый спирт и 80%-ную муравьиную кислоту в отношении 3:2.

Хроматографическую бумагу с нанесенными на нее пробами сшивают в форме цилиндра (к

страница 23
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
спортивный комплекс в квартиру дск-2
санки-коляска snow galaxy 1
антресоль шм-1а
защита от камер гибдд наклейки на номер авто отзывы

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(28.02.2017)