химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

по 20—30 мкМ). В другой пробе в среду инкубации вносят суспензию митохондрий (3—5 мг белка на 1 мл пробы), 5 мкМ ротенон и регистрируют в течение 1—2 мин концентрацию К+ во внешней среде. В пробу добавляют валиномицин (около 0,1 нмоль на 1 мг белка), измеряют концентрацию ионов К+ во внешней среде и рассчитывают скорость его диффузии в стационарном состоянии. Внесением 2,4-динитрофенола (100 мкМ.) индуцируют выход ионов К+ во внешнюю среду. Содержание эндогенного К+ в митохондриях определяют добавлением к суспензии митохондрий в среде инкубации раствора детергента (тритон-Х-100) до конечной концентрации 0,1%. Изменения концентрации К+ в среде рассчитывают по калибровочной кривой.

Используя описанный методический подход, студентам предлагается самостоятельно провести следующие исследования.

1. Измерение скорости проникновения Н+ через мембрану интактных митохондрий.

2. Изучение ионообменных свойств митохондриальной мембраны (К+—Са2+-обмен) (см. п. 3 списка литературы).

3. Изучение зависимости проницаемости мембраны митохондрий для ионов К+ от рН.

ЛИТЕРАТУРА

1. Финеан Дж. Биологические ультраструктуры. М., 1970.

2. Mas sari S., Azzone G. F. The mechanism of ion translocation in mitochondria. 2. Active transport and proton pump//Europ. J. Biochem. 1970. Vol. 12. P. 310.

3. Scarpa A., Azzone G. F. The mechanism of ion translocation in mitochondria, 4. Coupling of K+ efflux with Caa+ uptake//Europ. J. Biochem. 1970. Vol. 12. P. 328.

2. ИЗУЧЕНИЕ ПРОНИЦАЕМОСТИ МИТОХОНДРИАЛЬНОЙ МЕМБРАНЫ ДЛЯ РАСТВОРОВ ЭЛЕКТРОЛИТОВ

Наружная и внутренняя мембраны митохондрий имеют неодинаковую проницаемость для различных веществ. Наружная мембрана легко проницаема для катионов, анионов и небольших незаряженных молекул, но препятствует проникновению крупных белковых молекул, на

пример цитохрома с. Внутренняя мембрана непроницаема для многих катионов и анионов. Для проникающих ионов в мембране имеются специальные белки-переносчики. Пассивный перенос веществ через мембрану митохондрий в значительных количествах происходит только тогда, когда он не сопровождается образованием на мембране градиентов заряда или рН. Так, проникающий катион будет поступать в митохондрии по градиенту концентрации только в том случае, если в среде присутствует проникающий анион или если прохождение катиона внутрь митохондрий сопровождается выходом положительно заряженных частиц из внутримитохондриального пространства. Мембрана митохондрий проницаема для Са2+, Mg2+, Мп2+, фосфата и практически непроницаема для Н+, К+, С1- и др. Ион аммония проникает в виде незаряженной молекулы аммиака. Предполагают, что ацетат проникает через внутреннюю мембрану в виде незаряженной молекулы кислоты, а фосфат — в виде моноаниона. Возможная схема проникновения в митохондрии соли NH4+CH3COO- показана на рис. 54. На рис. 55 дана схема прохождения через мембрану двузамещенного фосфата аммония.

наружное пространство

[.'мембрана

внутреннее пространство

NH

СН3СОО + Н+

Рис. 54. Схема переноса аммиака и уксусной кислоты через внутреннюю мембрану

митохондрий

наружное пространство мембрана;;

внутреннее пространство

НРОа + Н+

Н2Р04

2Р04

Н+ + НРО4

ОН"

ОН"

NH

+

Н+ + NH3 С

:-: "_ ~N NH3 + Н

,'.[ IN III I';'"J v

+

NH:

Рис. 55. Поглощение фосфата аммония митохондриями

Внутренняя митохондриальная мембрана свободно проницаема для воды. В отношении непроникающих веществ митохондрии ведут себя как идеальные осмометры, т. е. подчиняются уравнению:

V=K/C+Vc-~»,

где V — объем митохондрий; К — константа; С — суммарная осмотическая концентрация раствора, в который помещены митохондрии; V'C-KX> — осмотически «мертвое» пространство, т. е. объем, который митохондрии занимают в среде с бесконечно большой осмотической концентрацией. Так как оптическая плотность суспензии митохондрий обратно пропорциональна объему взвешенных частиц, приведенное выше уравнение можно записать в виде

l/D=Ki/C+l/Z?c-«o,

где D — оптическая плотность. Чем выше концентрация непроникающей через мембрану соли, тем меньше объем митохондрий, тем выше оптическая плотность их суспензии.

Таким образом, осмотическое поведение митохондрий можно изучать, измеряя поглощение света суспензией. При этом выбирают такую длину волны, чтобы ослабление света при прохождении через суспензию было обусловлено только рассеивающими свойствами митохондрий (520 нм). При такого рода исследованиях к митохондриям обычно добавляют ингибиторы дыхания, чтобы исключить влияние метаболических изменений объема на результаты измерений.

В задачу настоящей работы входит изучение осмотических свойств митохондрий печени крысы в растворах различных электролитов.

Реактивы:

1. Реактивы для выделения митохондрий печени (с. 406).

2. КО и NH4C1 — растворы следующих концентраций: 0,05; 0,10; 0,15; 0,20; 0,25; 0,30; 0,40; 0,50; 0,75; 1,00 и 1,25 М.

3. (NH4)2HP04 — растворы следующих концентраций: 0,066; 0,133; 0,200; 0,333; 0,500; 0,666 и 0,833 М.

4. Трис-НО — 0,0012 М раств

страница 229
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
http://taxiru.ru/fotootchet_forum_taksi/
гастрольный тур руки вверх 2018 году
Компания Ренессанс лестницы для дачи - надежно и доступно!
мячи селект для мини футбола купить

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(11.12.2017)