химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

) и фиксируют величину отскока пера самописца. 3. Ферментативную активность выражают в мкмолях окисленного НАДН за 1 мин в расчете на 1 мг белка препарата Кейлина — Хартри.

ЛИТЕРАТУРА

1. Gutman М., Singer Т. Р., С a side J. Е. Binding sites of rotenone, piericidin A and amytal in the respiratory chain//J. Biol. Chem. 1970. Vol. 245. P. 1992.

2. Suzuki H., King Т. E. Evidence of an ubisemiquinone radical(s) from the NADH-ubiquinone reductase of the mitochondrial respiratory chain//J. Biol. Chem.

1983. Vol. 258. P. 352.

3. Ear ley F. G. P., Ragan С. I. Photoaffinity labelling of mitochondrial NADN

dehydrogenase with arylazidoamorphigenin an analoque of rotenone//Biochem, J.

1984. Vol. 224. P. 525.

4. Уэбб Л. Ингибиторы ферментов и метаболизма. М., 1966.

V. ПРОНИЦАЕМОСТЬ МЕМБРАН И ТРАНСЛОКАЗНЫЕ РЕАКЦИИ В МИТОХОНДРИЯХ

1. ПЕРЕНОС ИОНОВ КАЛИЯ ЧЕРЕЗ МИТОХОНДРИАЛЬНУЮ МЕМБРАНУ

Внутренняя мембрана митохондрий обладает специфической проницаемостью для различных катионов и анионов. Это свойство делает митохондрии удобной моделью для изучения переноса веществ через биологические мембраны. Изолированные митохондрии содержат значительные количества катионов и анионов, причем количественно преобладает катион калия. При инкубации митохондрий в бескалиевой среде с помощью специального электрода удобно изучать основные закономерности переноса заряженной частицы через мембрану.

Рассмотрим процессы, происходящие при уравнивании концентрации ионов К+ во вне- и внутримитохондриальном пространстве (рис.53). Внутренняя мембрана митохондрий плохо проницаема для К~^. Поэтому если митохондрии с высоким содержанием калия в матриксе поместить в бескалиевую среду, то калий в окружающей среде практически не появляется. Специфическую проницаемость мембраны для К4* можно индуцировать антибиотиком валиномицином, представляющим собой циклический депсипептид с выраженными гидрофобными свойствами и способным к комплексообразованию с К+. Добавление к митохондриям валиномицина создает потенциальную возможность для выравнивания концентраций ионов К+ по обе стороны мембраны. Если бы диффундируемые частицы не были заряжены, следовало бы ожидать практически полного перехода их во внешнюю среду (внутренним суммарным объемом митохондрий по сравнению с объемом внешвремя

концентрация К во внешней среде

+ 2,4-динитрофенол

валиномицин

митохондрии

Рис. 53. Изменения концентрации К+ в среде, регистрируемые с помощью Нечувствительного электрода

ней среды можно пренебречь). Наличие у ионов К4" электрического заряда уже при прохождении первых порций К+ через мембрану создает потенциал, который уравновешивает существующий градиент концентраций и останавливает движение катиона во внешнее пространство. Для поддержания процесса уравнивания концентраций необходимо одно из двух условий: движение отрицательно заряженных ионов из митохондрий в окружающее пространство либо движение положительно заряженных ионов из внешней среды в митохондрии. Оба процесса будут препятствовать возникновению диффузионного потенциала на мембране и обеспечат, таким образом, свободный выход иона К+. Для снятия электрического потенциала удобно воспользоваться 2,4-динит-рофенолом, способным быстро диффундировать через мембрану как в ионизованном, так и в протонированном состоянии. Добавление ди-нитрофенола обеспечит выход ионов К+ из митохондрий в окружающую среду и перенос ионов Н+ в обратном направлении. При этом наблюдается быстрый выход К+ из митохондрий. Результатом этого будет увеличение концентрации ионов Н+ внутри митохондрий, однако буферная емкость внутримитохондриального пространства достаточно велика для практически полной компенсации закисления.

Аналогичные рассуждения могут быть применены для рассмотрения переноса через мембраны других заряженных частиц, независимо от конкретного механизма их переноса.

В настоящей задаче предлагается экспериментально изучить процесс переноса К+ через внутреннюю мембрану изолированных митохондрий печени крысы.

АЛЯ

Реактивы: '

1. Реактивы для выделения митохондрий печени крысы (с. 406).

2. Среда инкубации: 0,15 М сахароза, 75 мМ холин-хлорид, 2,5 мМ. MgCl2, 5 мМ трис-HCl, рН 7,4.

3. Валиномицин — 1 ? 10~4 М раствор в перегнанном этаноле.

4. 2,4-динитрофенол — 1 • Ю-2 М раствор рН 7,4.

5. СаС12 — 5-10"3 М раствор.

6. КО — 5-Ю-3 М раствор.

7. Детергент (тритон-Х-100) — 10%-ный раствор.

8. Ротенон — 5-Ю-"4 М раствор в перегнанном этаноле.

Примечание. При приготовлении всех растворов следует тщательно избегать загрязнения их калиевыми солями. При необходимости доведения рН следует пользоваться 1 М раствором триса и рН-метром> электрод сравнения которого заполнен 0,1 М КО,

Получают митохондрии печени крысы согласно описанию на с. 406. В кювету с постоянным перемешиванием, содержащую 3 мл среды инкубации, помещают К+-чувствительный электрод и, установив перо самописца на середину шкалы, калибруют чувствительность прибора внесением 4—6 добавок раствора КО с точно известной концентрацией (

страница 228
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
курсы автокада в одинцово
флип-флап купить
Кликни на ссылку получи бонус на заказ с промокодом "Галактика" в KNS - HP ProBook 450 G3 - поставка по всей России.
билетные агентства в москве

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(05.12.2016)