химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

и-рования//Усп. биол. химии. М., 1964. Вып. 6. С. 156.

3. С кул ач ев В. П. Аккумуляция энергии в клетке. М.., 1969.

4. Chance В, Williams G R The respiratory chain and oxidative phosphorylati-on//Adv. in Enzymol. 1956. Vol. 17. P. 65.

2. ОКИСЛЕНИЕ НАДН В МИТОХОНДРИЯХ РАЗЛИЧНЫХ ТКАНЕЙ

Пиридиннуклеотиды принадлежат к числу широко распространенных низкомолекулярных компонентов клетки. Так, суммарное содержание НАД(Ф)+ и НАД(Ф)Н в печени, например, превышает 1 мкмоль/г сырого веса ткани. Пиридиннуклеотиды выполняют важную метаболическую функцию, являясь кофакторами большого числа дегидрогеназ.

Соотношение окисленных и восстановленных форм пиридиннукле-отидов — важный функциональный показатель, характеризующий скорость и направление обменных процессов в клетках и тканях. Очевидно, что величина этого соотношения определяется, с одной стороны, активностью НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ, а с другой стороны — активностью систем, катализирующих окисление восстановленных пиридиннуклеотидов.

Сопряженное с синтезом АТФ окисление НАДН в дыхательной цепи митохондрий представляет собой один из путей утилизации восстановительных эквивалентов клетки. Внутренняя мембрана митохондрий непроницаема для пиридиннуклеотидов и добавленный НАДН может быть окислен в дыхательной цепи только после разрушения внутренней мембраны. Однако в клетке существуют специальные «челночные механизмы», которые обеспечивают окисление цитоплазматичес-кого НАДН дыхательной цепью и не требуют его переноса через внутреннюю мембрану митохондрий.

В митохондриях некоторых тканей (печени, почки и др.) была обнаружена еще одна НАДН-оксидазная система, которая локализована в наружной мембране и, по-видимому, легко доступна для цитоплаз-матического НАДН. Этот так называемый «внешний, нефосфорилирую-щий путь окисления НАДН» включает в себя специфический флавопротеид — НАДН: цитохром 65-оксидоредуктазу и цитохром 65. Цитохром Ьь является слегка аутоксидабельным гемопротеидом, а физиологическим акцептором электронов с цитохрома Ь$, по-видимому, служит цитохром с. В экспериментальных условиях активность этого пути окисления НАДН может быть измерена только после добавления цитохрома с, значительная часть которого вымывается из межмембранного пространства в процессе выделения митохондрий. В отличие от НАДН-оксидазной активности дыхательной цепи митохондрий внешний путь окисления НАДН нечувствителен к ротенону.

В настоящей задаче студенту предлагается ознакомиться с путями окисления НАДН в митохондриях сердца и печени крысы.

Реактивы:

1. Реактивы для выделения митохондрий печени и сердца крысы (с. 405, 406).

2. Среда инкубации: 0,15 М сахароза, 75 мМ КО, 2,5 мМ MgCl2 и 5 мМ КН2Р04, рН 7,4.

3. Цитохром с — 10 мг/мл.

4. Ротенон — 5-Ю-4 М раствор (в этиловом спирте).

Митохондрии сердца и печени крысы получают в соответствии с описанием на с. 405, 406 и хранят на льду. Отбирают часть полученной суспензии (около половины) в отдельную полиэтиленовую пробирку, быстро замораживают препарат жидким азотом или сухим льдом и вновь размораживают, нагревая до 0° С. Процедуру замораживания-оттаивания, при которой происходит разрушение митохондрий, повторяют еще дважды. Размороженный препарат митохондрий суспендируют пипеткой и хранят на льду.

сравнивают плдп-оксидазную активность интактных и разрушенных митохондрий. Для этого в кювету полярографа наливают 2 мл среды инкубации, погружают в нее электроды и устанавливают исходное значение диффузионного тока (крайнее правое положение пера на диаграмме самописца КПС-4). Добавляют в кювету около 0,05 мл суспензии интактных или разрушенных митохондрий и спустя 1 мин добавляют НАДН в конечной концентрации Ю-3 М. В течение 1— 2 мин регистрируют оксидазную активность, после чего в кювету добавляют ротенон в конечной концентрации 5 -10—6 М. Спустя еще 1 мин в кювету добавляют цитохром с в конечной концентрации 100 мкг/мл и регистрируют оксидазную активность до полного исчерпания кислорода в среде.

Рассчитывают активности внутреннего (чувствительного к ротено-ну) и внешнего путей окисления НАДН в митохондриях. Полученные данные анализируют.

В качестве дополнения к задаче предлагается использовать другие методы разрушения внутренней мембраны: обработку митохондрий слабым раствором детергента (0,005—0,01%-ный тритон Х-100) или ультразвуком, создание «осмотического шока».

ЛИТЕРАТУРА

1. Рэкер Э. Биоэнергетические механизмы. М., 1967.

2. Ленинджер А. Биохимия. М., 1974.

3. Евтодиенко Ю. В., Скулачев В. П., Чистяков В. В. Участие цитохрома Ь5 в окислительных системах печени//Митохондрии. Структура и функции. М.„ 1966. С. 113.

4. Sottocasa G. L., Sandri G. The permeability to pyridine nucleotides of microsomes and outer mitochondrial membrane from rat liver//Biochemistry of intracellular structures. PWN. Warszawa, 1969. P. 7.

3. ФУНКЦИОНИРОВАНИЕ ПЕРВОГО ПУНКТА СОПРЯЖЕНИЯ В ИНТАКТНЫХ МИТОХОНДРИЯХ

Дыхательная цепь митохондрий представлена четырьмя дыхательными комплексами, катализирующими парциальные

страница 225
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
курсы маеияжа и косметолога
обслуживание вентилляционных установок обучение
117 733-6
детский гироскутер по самой низкой цене

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(09.12.2016)