химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

e//J. Biol. Chem. 1972. Vol. 247. P. 6375.

2. Hartzell C. R., Beinert H., G elder B. F. van, King Т. E. Preparation of cytochrome oxidase from beef heart//Methods in Enzymology. N. Y., 1978. Vol. LIII. P. 54.

3. Yonetani Т. Studies on cytochrome oxidase. Ш. improveu PIVPAMUWU ANU. АШИ* properties//J. Biol. Chem. 1961. Vol. 236. P. 1680.

4 Capaldi R. A., Malatesta F., Darley-Usmar V. M. Structure of cytochrome с oxidase//Biochim. Biophys. Acta. 1983. Vol. 726. P. 135.

5. Nicholls P., Hildebrandt V., Hill В. C. et a 1. Pathways of cytochrome с oxidation by soluble and membrane-bound cytochrome oa3//Can. J. Biochem. 1980. Vol. 58. P. 969.

IV. ФУНКЦИОНИРОВАНИЕ ДЫХАТЕЛЬНОЙ ЦЕПИ

1. ДЫХАТЕЛЬНАЯ ЦЕПЬ. ИНГИБИТОРЫ ПЕРЕНОСА ЭЛЕКТРОНОВ

Перенос электронов от субстратов цикла трикарбоновых кислот к кислороду, сопровождающийся образованием воды, осуществляется сложной полиферментной системой, локализованной во внутренней мембране митохондрий. Последовательность функционирования отдельных дыхательных переносчиков в значительной мере была выяснена благодаря применению ингибиторного анализа, а также спектрофотометри-ческих исследований. В настоящее время строение дыхательной цепи может быть представлено схемой на рис. 51.

НАДН 1 p0Tfон

\

флавопротеид НАДН-дегидро-геназа

флавопротеид сукцинатдегидрогеназа

/ t

сукцинат |малонат

антимицин А

CN7 Щ

KoQ, цит Ъ —цит. с, —>? цит. с —цит аа3 —**02

+ ТМФД

t

аскорбат

Рис. 51, Схема переноса электронов в дыхательной цепи (места действия ингибиторов указаны жирными стрелками)

Окислительно-восстановительные потенциалы каждого переносчика увеличиваются по мере приближения к кислороду, так что электроны, отщепленные от субстратов соответствующими дегидрогеназами, переносятся к кислороду термодинамически самопроизвольно. Внутренняя мембрана митохондрий содержит полную дыхательную цепь с двумя дегидрогеназами (сукцината и НАДН). Известно несколько специфических ингибиторов переноса электронов.

В настоящей работе предлагается изучить действие ингибиторов на суммарную реакцию, катализируемую дыхательной цепью — поглощение кислорода. Опыты проводят с препаратами Кейлина—Хартри, для измерения потребления кислорода пользуются полярографическим методом (с. 480).

Реактивы:

1. Реактивы для получения препарата Кейлина—Хартри (с. 407).

2. Фосфат калия — 0,1 М раствор, рН 7,6.

•d. цитохром с — 1 мг/мл. I

4. НАДН — 0,1 М раствор, рН 7,6.

5. Сукцинат калия — 0,5 М раствор, рН 7,6.

6. Аскорбиновая кислота — 0,5 М раствор, рН 7,6.

7. Тетраметил-я-фенилендиамин (ТМФД) — 0,01 М раствор.

8. Малонат калия — 0,5 М раствор, рН 7,6.

9. Антимицин А — 0,1 мг/мл (готовят в перегнанном этаноле). 10. Ротенон — 1 мг/мл (готовят в перегнанном этаноле).

Определение типа ингибирования окисления сукцината малонатом.

Выделяют препарат Кейлина—Хартри (с. 407).

Пять кювет полярографа заполняют раствором, содержащим ?,1 М фосфатный буфер (рН 7,6) и цитохром с (100 мкг/мл). Объем раствора в каждой кювете — 2 мл. В пробы с помощью микропипеток добавляют сукцинат в конечных концентрациях 0,3; 0,6; 1,25; 5,0 мМ. Измеряют скорость дыхания в присутствии различных концентраций субстрата. Для этого кювету устанавливают в штативе полярографа, погружают в нее электроды. После установления начального значения тока добавляют 0,05 мл суспензии препарата Кейлина—Хартри (1,5 мг/мл) и регистрируют поглощение кислорода. Во всех пробах рассчитывают скорость дыхания в микромолях поглощенного кислорода за 1 мин на 1 мг белка.

Измерения повторяют в тех же условиях, но во все пробы добавляют вначале 200 мкМ, а затем — 300 мкМ малонат.

Строят график зависимости скорости дыхания от концентрации сукцината и определяют тип ингибирования

Места действия ингибиторов. Кювету полярографа заполняют фосфатным буфером, содержащим 100 мкг цитохрома с в 1 мл. Объем пробы — 2 мл. Добавляют 0,05 мл суспензии препарата Кейлина— Хартри и, установив кювету в штатив полярографа, дожидаются постоянного значения тока. Реакцию начинают добавлением НАДН (1 мМ) и спустя 1 мин после начала дыхания добавляют 0,02 мл раствора ротенона. После установления постоянной скорости дыхания в кювету добавляют сукцинат (5 мМ) и спустя еще 1 мин — 0,02 мл раствора антимицина А. Торможение дыхания снимают добавлением в кювету 100 мкМ ТМФД. В присутствии последнего дыхание обеспечивается активностью сукцинатдегидрогеназы и цитохромоксидазного участка дыхательной цепи. В таких условиях дыхание может быть заторможено блокированием сукцинатдегидрогеназы (плюс 5 мМ малонат) и активировано неферментативным восстановлением ТМФД ас-корбатом (5—10 мМ аскорбат). Полученная полярограмма позволяет сделать вывод о местах действия ингибиторов и путях переноса электронов в дыхательной цепи митохондрий

ЛИТЕРАТУРА

1. Котельяикова А. В. Промежуточные реакции при процессах окислительного фосфор ил ирования//Усл. биол. химии. М., 1962. Вып. 4. С. 173.

2. Котельникова А. В. Новые данные о механизме окислительного фосфорил

страница 224
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
рамка перевёртыш номеров
купить набор рыбака
мастер курс метро курская
основы системного администрирования курсы

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(08.12.2016)