химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

onent of the respiratory chain as studied by electron paramagnetic resonance spectroscopy//.!. Biol. Chem. 1964. Vol. 239. P. 3017.

2. N e 1 s о n D. В., G e 11 e г f о r s P. Characterization and resolution of complex III from beef heart mitochondria//Methods in Enzymology/S. Fleisher, L. Packer eds. N. Y. 1978. P. 80.

3. Y u С. А., К i n g Т. E. Soluble cytochrome b—C\ complex and the reconstitution of succinate-cytochrome с reductase//.!. Biol. Chem. 1974. Vol. 249. P. 4905.

4. Wikstrom M. Properties of three cytochrome Ь-like species in mitochondria and submitochondrial particIes//Biochem. Biophys. Acta. 1971. Vol. 253. P. 332.

5. К i n g Т. E. Cytochrome Ci from mammalian heart//Methods in Enzymology/ /S. Fleisher, L. Packer eds. N. Y. 1978. P. 181.

?. Trumpower B. L., Edwards C. A., Ohnishi T. Reconstitution of the iron— sulfur protein responsible for g=l,90 electron paramagnetic resonance signal and associated cytochrome с reductase activities to depleted succinate-cytochrome с reductase complex//,!. Biol. Chem. 1980. Vol. 255. P. 7487.

7. Guerrieri F., Nelson B. D. Studies on the characteristics of a proton pump in

phospholipid vesicles inlayed with purified Complex III from beef heart tnitochond-ria//FEBS Lett. 1975. Vol. 54. P. 339. 8. M i t с h e 11 P. Protonmotive redox mechanism of the cytochrome b—Ci complex ire the respiratory chain: protonmotive ubiquinone cycle//FEBS Lett. 1975. Vol. 56. P. 1.

*

7. ПОЛУЧЕНИЕ ЦИТОХРОМОКСИДАЗЫ (КОМПЛЕКС IV)

Перенос электронов по дыхательной цепи митохондрий завершает цитохромоксидаза (цитохром сЮд-оксидоредуктаза, комплекс IV), катализирующая реакцию восстановления молекулярного кислорода до> воды. Донором электронов для фермента служит ферроцитохром с. Реакция специфически блокируется цианид- и азид-ионами, а также окисью углерода. Цитохромоксидаза прочно связана с внутренней мембраной митохондрий и является интегральным мембранным белком: в раствор фермент может быть высвобожден лишь после растворения мембраны высокими концентрациями детергентов. В нативной мембране, а также в растворах неионных детергентов (тритон Х-100,. твин-80, Emasol-1130) цитохромоксидаза присутствует в виде высокоактивного димера. Некоторые воздействия (рН>8,5, высокие концентрации солей и неионных детергентов) вызывают появление мономерных форм фермента. Каталитическая активность цитохромоксидазы зависит от степени агрегации молекулы фермента.

Цитохромоксидаза представляет собой сложный белковый комплекс, в состав которого входит по меньшей мере 8 индивидуальных лолипептидов. Во внутримолекулярном переносе электронов участвуют простетические группы фермента: гемы а и аз, а также 2 атома меди: CUA И CUB. Трансмембранный перенос электронов от цитохрома с к молекулярному кислороду сопровождается векторным переносом протона из матрикса митохондрий в межмембранное пространство. Разность электрохимических потенциалов ионов водорода, генерируемая в цитохромоксидазной реакции на мембране митохондрий, может быть использована для синтеза АТФ.

В настоящей работе предлагается выделить очищенный препарат цитохромоксидазы, оценить степень его чистоты и изучить его кинетические свойства.

Реактивы и оборудование:

1. Реактивы для выделения препарата Кейлина—Хартри (с. 407)^

2. 0,1 М фосфатно-боратный буфер, рН 7,6.

3. Холат натрия — 10%-ный раствор, рН 7,8.

4. Фосфат натрия — 0,1 М раствор, рН 7,4.

5. Фосфат натрия — 0,1 М раствор, (рН 7,4), содержащий 1,5%-ный холат натрия.

6. Фосфат натрия — 0,1 М раствор, (рН 7,4), содержащий 1%-ный твин-80.

7. Фосфат натрия — 0,1 М раствор, (рН 7,4), содержащий 0,25%-ный твин-80.

8. Сульфат аммония — кристаллический.

9. Сульфат аммония — насыщенный при комнатной температуре раствор.

10. Дитионит натрия.

11. Фосфат натрия — 0,05 М раствор (рН 7,4), содержащий 1%-ный твин-80.

л оо

12. Аскорбиновая кислота — 1 М раствор (рН 7,4)

13. Цитохром с — 2 мМ раствор.

14. NaOH — 1 М раствор.

15. Полярограф с набором кювет и микропипеток.

Выделение цитохромоксидазы. Выделяют препарат Кейлина— Хартри из двух сердец быка (с. 407).

К 80 мл препарата Кейлина—Хартри, суспендированного в 0,1 М фосфатно-боратном буфере (рН 7,6), с концентрацией белка 20 мг/мл при осторожном перемешивании добавляют 8,8 мл 10%-ного раствора холата натрия (конечная концентрация холата — 1%). Затем медленно, порциями добавляют твердый сульфат аммония до насыщения 25% (0,136 г/мл). Уменьшение рН раствора компенсируют добавлением 1 М NaOH (до рН 8,0). Смесь оставляют на 1 ч при постоянном перемешивании, затем добавляют твердый сульфат аммония до насыщения 35% (0,056 г/мл). Компенсируют уменьшение рН добавлением 1 М NaOH. Через 10 мин суспензию центрифугируют в течение 60 мин при 20 000 Прозрачный оранжево-красный супернатант отбрасывают (или используют для выделения сукцинатщитохром с-ре-дуктазы — см. с. 426), а коричнево-зеленый осадок суспендируют в 0,1 М фосфатном буфере (рН 7,4) в конечном объеме 60 мл. К су

страница 222
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
товары для настольного тенниса в тольятти купить
подарки для школьников на 23 февраля и 8 марта
металлические стойки для обуви
кресло рапсодия т3

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(03.12.2016)