химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

сукцинат натрия, 0,2 мМ ЭДТА и 0,1%-ный тритон Х-100.

12. Буфер VI, содержащий 20 мМ фосфат калия (рН 7,8), 20 мМ малонат калия, 0,2 М ЭДТА (обязательно калиевая соль) и 0,1%-ный тритон Х-100.

13. Буфер VII, содержащий 20 мМ фосфат натрия (рН 7,4) и 0,2 мМ ЭДТА.

14. Кальций-фосфатный гель (см. приготовление на с. 114).

15. Малонат калия — 20 мМ раствор, содержащий 0,2 мМ ЭДТА (обязательно калиевая соль) и 0,1%-ный тритон Х-100

16. Среда измерения активности, содержащая 20 мМ фосфат натрия (рН 7,8), 20 мМ сукцинат натрия, 0,2 мМ ЭДТА и 0,004%-ный тритон Х-100.

17. Синий Вурстера, СВ (свободный катион-радикал тетраметил-парафенилендиамина) — 3 мМ раствор (готовят в день опыта)

18. Q2 — 5 мМ раствор, приготовленный на перегнанном этаноле

19. Уксусная кислота — 1 М раствор.

20. NaOH — 1 М раствор.

21. Аммиак — концентрированный раствор.

22. Сульфат аммония — кристаллический.

23. Теноилтрифторацетон (ТТА) — 20 мМ раствор, приготовленный на перегнанном этаноле.

Выделяют препарат Кейлина—Хартри из двух сердец быка (с. 407). Препарат тщательно суспендируют в 0,25 М сахарозе и доводят содержание белка до 40 мг/мл, замораживают при —20° С. Все процедуры выделения проводят при температуре 0—4° С. В стакане на 0,5 л к 75 мл замороженного и тщательно суспендированного препарата добавляют буфер I до суммарного объема 120 мл и 5 мл 1 М сукцината натрия. Смесь инкубируют 20 мин. Затем при хорошем перемешивании по каплям из делительной воронки добавляют 125 мл

4 М раствора мочевины, приготовленного на буфере II. Смесь инкубируют 30 мин, в конце инкубации разводят в 2 раза буфером III, рН смеси доводят до 6,0 с помощью 1 М СН3СООН и центрифугируют при 22 000 ^ в течение 90 мин. Желтый, мутноватый супернатант отбрасывают, осадок гомогенизируют в буфере IV, разводят до 250 мл и снова центрифугируют 2 50 мин. Полученный осадок гомогенизируют в 50 мл буфера IV и до утра оставляют при —20° С.

Размороженный осадок тщательно гомогенизируют и разводят буфером IV до объема 170 мл. По каплям из делительной воронки при хорошем перемешивании добавляют 17 мл 10%-ного раствора тритона Х-100. После 30 мин инкубации рН смеси доводят до 6,0 с помощью 1 М СНзСООН. Смесь центрифугируют 30 мин. Супернатант аккуратно по стенкам сливают через воронку с 4 слоями марли. рН супернатанта доводят до 7,5 1 М NaOH и оставляют на холоде Осадок гомогенизируют в 135 мл буфера IV, рН доводят до 7,5 и добавляют по каплям из делительной воронки 1 мл 10%-ного раствора тритона Х-100. Через 30 мин инкубации рН доводят до 6,0 Ш СНзСООН и смесь центрифугируют 30 мин. Супернатант фильтруют через 4 слоя марли, доводят рН до 7,5 1М NaOH и объединяют с первым экстрактом. Измеряют общий объем объединенных экстрактов. К тритоновому экстракту в стакане на 1 л при очень хорошем охлаждении (стакан должен быть полностью погружен в сосуд с тающим льдом) и перемешивании (магнитная мешалка) из делительной воронки тонкой струей по стенке стакана добавляют равный объем ацетона, предварительно охлажденного при —20° С. Смесь сразу центрифугируют в стеклянных стаканах на 0,5 л на центрифуге К-70 в течение

2 Если это специально не оговорено в тексте, центрифугирование проводят при 22 000 g

5 мин при 1300 g. Полученный осадок суспендируют в 150 мл буфеpa III. К суспензии приливают из делительной воронки 8 мл 20%-ного раствора холата натрия и добавляют небольшими порциями в течение 10—15 мин 27,8 г сульфата аммония (0,176 г на мл) до насыщения 30%. Уменьшение величины рН раствора компенсируют добавлением нескольких капель концентрированного раствора аммиака. Смесь инкубируют 20 мин и центрифугируют 15 мин. Супернатант фильтруют через 4 слоя марли и медленно, порциями добавляют сульфат аммония до насыщения 50% (0,125 г на мл). Через 20 мин смесь центрифугируют 15 мин. Полученный осадок оставляют при 0—4° С на ночь в центрифужном стакане.

Осадок гомогенизируют стеклянной палочкой в 6 мл буфера V, добавляют 42 мл холодного бидистиллята и 23 мл кальцийфосфатного геля, инкубируют при перемешивании 10 мин, смесь центрифугируют 5 мин и супернатант отбрасывают. Плотный осадок геля тщательно гомогенизируют с помощью гомогенизатора Поттера в 50 мл раствора, содержащего 0,1% тритона Х-100, 0,2 мМ ЭДТА и 20 мМ малонат калия, и центрифугируют 5 мин. Супернатант отбрасывают. Осадок гомогенизируют в 50 мл буфера VI, инкубируют 15 мин и центрифугируют 5 мин. При этом в супернатант специфически элюируется СУР. Элюцию повторяют, используя для вторичной экстракции 25 мл буфера VI. Супернатанты объединяют. При хорошем охлаждении и перемешивании добавляют равный объем охлажденного до —20° С ацетона. Смесь немедленно центрифугируют при 1300 g в течение 15 мин в стеклянных стаканах на 0,5 л на центрифуге К-70. Осадок суспендируют в 3 мл буфера VII для удаления остатков ацетона и центрифугируют 20 мин при 30 000^. Полученный осадок СУР суспендируют в 3 мл буфера VII, отбирают на определение белка 40 мкл препарата, а остальное количество разливают в полиэтиленовые ампулы

страница 217
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
wizardfrost.ru
встраиваемые светильники для лестницы в доме
урна уличная ук-6
тарелки из нержавейки купить

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(27.04.2017)