химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

створа НС1 и рассчитывают удельную активность в микромолях АДФ, превращенного за 1 мин в расчете на 1 мг белка.

Студентам предлагается самостоятельно выполнить следующие работы:

1. Солюбилизация внешней и внутренней мембраны митохондрий различными ионными и неионными детергентами.

2. Сравнение эффективностей окислительного фосфорилирования, катализируемого интактными митохондриями и митопластами.

3. Сравнение эффективности АМФ в/ качестве акцептора фосфата в интактных митохондриях и митопластах.

4. Сравнение сукцинат: цитохром с-редуктазных активностей интактных митохондрий, митопластов и препаратов внутренних мембран.

ЛИТЕРАТУРА

1. Рэкер Э. Мембраны митохондрий//Молекулы и клетки/Под ред. Г. М. Франка. М., 1969. Вып. 4. С. 150.

2. Kara в а Я. Биомембраны. М., 1985.

3. Schnaitman С, Greenwalt J. W. Enzymatic properties of the inner and outer membrane of rat liver mitochondria//J. Cell. Biol. 1968. Vol. 38. P. 158.

III. ПОЛУЧЕНИЕ ОТДЕЛЬНЫХ КОМПОНЕНТОВ ДЫХАТЕЛЬНОЙ ЦЕПИ И РЕКОНСТРУКЦИЯ ПОЛИФЕРМЕНТНЫХ СИСТЕМ

Дыхательная цепь представляет собой полиферментный липопро-теидный ансамбль, осуществляющий НАДН:- и сукцинат: кислород-ок-сиредуктазные реакции. В состав дыхательной цепи входят флавопро-теиды, железо-серные негемовые белки, убихинон и убихинон-связываю-тцие белки, цитохромы и медьсодержащие белки, представленные примерно 45 индивидуальными полипептидами, а также фосфолипиды ( — 0,4 мг/мг белка). В интактных митохондриях все компоненты дыхательной цепи прочно связаны с их внутренней мембраной. Для перевода в «растворимое» (мелкодисперсное) состояние всех компонентов дыхательной цепи, кроме цитохрома с, приходится прибегать к «жестким» воздействиям — применению органических растворителей (этанола, бутанола), детергентов (холата, дезоксихолата, тритона Х-100, алкилгликозидов), хаотропных агентов (перхлоратов, тиоцианатов, трихлорацетата) или экстремальных значений рН. Дальнейшее фракционирование солюбилизированных препаратов, например высаливанием из растворов, содержащих детергент, зачастую представляет собой скорее эмпирически найденные искусные приемы, чем четко описываемый в терминах физической химии контролируемый процесс.

При работе с изолированными компонентами дыхательной цени отсутствуют четкие функциональные критерии очистки (общая и удельная активности). Любой компонент дыхательной цепи (кроме первых, реагирующих с НАДН или сукцинатом, и последнего, реагирующего с кислородом) катализирует бисубстратную реакцию, в которой в качестве субстрата-донора и субстрата-акцептора электронов участвуют ?белки, не полученные в индивидуальном состоянии. В такой ситуации единственным строгим критерием активности компонента, полученного в результате фракционирования, может служить реконструкция. Для ее осуществления в идеальном случае необходимо было бы иметь, во-первых, препарат внутренних мембран митохондрий, специфически и полностью лишенный одного из компонентов, и, во-вторых, «растворимый» очищенный препарат этого компонента. Смешивание этих препаратов в этом случае должно приводить к появлению сукцинат-, или НАДН-оксидазной активностей, количественно соответствующих исходному «нативному» препарату дыхательной цепи. К сожалению, такая реконструкция в настоящее время осуществлена лишь в отношении цитохрома с и частично — сукцинатдегидрогеназы. Стандартным подходом, сыгравшим главную роль во фракционировании дыхательной цепи, служит использование искусственных доноров и акцепторов в качестве субстратов реакции.

В сильно упрощенном виде, следуя терминологии школы Д. Грина, дыхательную цепь можно представить в виде четырех относительно независимых комплексов: I — НАДН: убихинон-оксидоредуктаза, II — сукцинат: убихинон-оксидоредуктаза; III — убихинол: цитохром с-оксидоредуктаза, IV—цитохром с: 02-оксидоредуктаза, объединяемых функционально чрезвычайно липофильным убихиноном и весьма гндНАДН

\

Q

III

IV,

сукцинат

II

Рис. 48. Четыре комплекса цепи переноса электронов в митохондриях

рофильным цитохромом с (рис. 48). Каждый из комплексов, в свою очередь, состоит из нескольких оксидоредуктаз, часть которых получена в гомогенном состоянии. Такое строение дыхательной цепи фактически предложено на основании работ по фракционированию ее на отдельные компоненты. Остается неизвестным, всегда ли отдельные компоненты комплекса в мембране нативных митохондрий функционируют в виде надмолекулярного структурного объединения.

Ниже приведены методы получения всех четырех комплексов. В качестве исходного материала (нативная дыхательная цепь) могут быть использованы либо ультразвуковые субмитохондриальные фрагменты, либо препарат Кейлина—Хартри (с. 407).

1. ОТДЕЛЕНИЕ И РЕКОНСТРУКЦИЯ КОМПОНЕНТОВ ДЫХАТЕЛЬНОЙ ЦЕПИ (СУКЦИНАТДЕГИДРОГЕНАЗА^

Сукцинатоксидазная система интактных митохондрий состоит по крайней мере из шести индивидуальных компонентов — переносчиков электронов: флавопротеида, кофермента Qio(KoQ), цитохромов в, си с и цитохромоксидазы. В 40-х годах Кейлину удалось показать,

страница 212
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
столики под телевизор
Компьютерная фирма КНС Нева предлагает видеокарту купить - специальные условия для корпоративных клиентов в Санкт-Петербурге!
дачный умывальник артикул: 010018
циан купить дачу на новой риге

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(24.03.2017)