химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

ии. Количественное содержание глюкозо-6-фосфата рассчитывают по формуле (с. 7).

13. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФРУКТОЗО-1,6-ДИФОСФАТА

Определение фруктозо-1,6-дифосфата может быть проведено пс фосфату после 3-часового гидролиза при 100°С в 1 н. растворе НС* или после гидролиза при 100°С в течение 10 мин в 0,2 н. растворе NaOH (с. 496). Определение фруктозодифосфата может быть проведено также по фруктозе.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПО ФРУКТОЗЕ

17 Можно использовать более разведенный препарат фермента при условии, что реакция будет завершена через 5 мин. После окончания реакции оптическая плотность реакционной смеси не должна изменяться.

Определение основано на цветной реакции Селиванова. При нагревании раствора фруктозы или ее эфиров с крепким раствором соляной

Окраска, образующаяся с фруктозофосфатом, менее интенсивна, чем с фруктозой. Интенсивность окраски с фруктозодифосфатом составляет только 52,5% интенсивности окраски свободной фруктозы, а с фруктозо-6-фосфатом — 60,5%, если проводить определение по данной прописи. Метод чувствителен в пределах от 0,05 до 0,7 мкмоль фруктозы в пробе.

Реактивы:

1. Резорцин — 0,1%-ный раствор на 95%-ном спирте.

2. НО — 30%-ный раствор (уд. вес. 1,15).

3. Фруктоза — стандартный раствор, содержащий в 1 мл 1 мкмоль фруктозы, готовят на 1 н. растворе НС1.

К 1 мл исследуемого раствора, не содержащего белка, приливают 1 мл раствора резорцина и 3 мл 30%-ного раствора соляной кислоты (соляную кислоту берут автоматической пипеткой или пипеткой с грушей). Все тщательно перемешивают и ставят пробы в водяной термостат при 80°С на 8 мин. Одновременно в тех же условиях проводят определение с различными количествами стандартного раствора фруктозы для построения калибровочного графика. Необходимо следить за равномерным нагреванием проб в термостате (неравномерное нагревание является одним из источников погрешности определения). Пробы вынимают из термостата, охлаждают, помещая в холодную воду, и фотометрируют при 490 нм

Для вычисления количества фруктозо-1,6-дифосфата найденную по калибровочному графику величину фруктозы умножают на коэффициент 1,9 (1,9=100:52,5). В качестве стандартного раствора можно пользоваться также раствором фруктозо-1,6-дифосфата, который готовят на дистиллированной воде, добавляя в качестве антисептика хлороформ. Если в качестве стандартного раствора используют раствор рЩфуктозодифосфата, то при расчете коэффициент не вводят. Однако % стандартным раствором фруктозо-1,6-дифосфата пользуются редко, так как чистота коммерческих препаратов его, как правило, меньше 100%.

АНАЛИЗ ЧИСТОТЫ БАРИЕВОЙ СОЛИ ФРУКТОЗО-1.6-ДИФОСФАТА

Осваивая методы определения фруктозо-1,6-дифосфата, полезно определить чистоту препарата его бариевой соли. Навеску, соответствующую 30 мкмоль, растворяют в 5 мл 0,1 н. раствора НС1. 1 мл раствора отбирают для определения фруктозо-1,6-дифосфата по фруктозе. Оставшиеся 4 мл солянокислого раствора бариевой соли фрукто-зодифосфата используют для получения натриевой соли, хорошо растворимой в воде (см. ниже). Раствор натриевой соли фруктозо-1,6-ди-фосфата нейтрализуют, доводят водой до 15 мл. В полученном растворе определяют содержание фруктозо-1,6-дифосфата по фруктозе и по фосфату в микромолях, рассчитывают чистоту препарата по фруктозе и по фосфату, сопоставляют данные. Определяют процент потери фрук-тозо-1,б-дифосфата при переводе бариевой соли в натриевую.

ПЕРЕВОД БАРИЕВОЙ СОЛИ ФРУКТОЗО-1 6-ДИФОСФАТА В НАТРИЕВУЮ

Натриевые соли гексозофосфатов (фруктозо-1,6-дифосфата, фрук-тозо-6-фосфата, глюкозо-6-фосфата), фосфоглицериновой кислоты готовят из их бариевых солей, удаляя барий в виде сернокислого бария или с помощью ионообменной смолы. Для этой цели удобно пользоваться катионитом КУ-2 или Дауэкс-50.

Реактивы:

1. Na2S04— 10%-ный раствор.

2. НС1 — 0,1 н. и 4 н. растворы.

3. NaOH— 1 н. раствор.

4. Катиониты (Дауэкс-50; КУ-2 и др.).

Обработка ионообменной смолы. Коммерческий препарат смолы перемешивают с 5—10 объемами 4 н. раствора НС1 в течение 20 мин, отсасывают на воронке Бюхнера и промывают дистиллированной водой до тех пор, пока рН фильтрата не станет равным 5—6. Осадок Смолы переносят с фильтрата в стакан, заливают 5 объемами 1 н. рас-створа NaOH, перемешивают в течение 20 мин, отсасывают на воронке Бюхнера и промывают дистиллированной водой, как указано выше. Смолу хранят под слоем дистиллированной воды.

Перевод бариевой соли с помощью ионообменной смолы. Навеску бариевой соли гексозофосфата помещают в центрифужную пробирку, содержащую небольшое количество суспензии катионита, и встряхивают. По мере адсорбции ионов бария происходит исчезновение мути. Пробирку оставляют на 10 мин, время от времени встряхивая, затем центрифугируют. Центрифугат сливают в мерную пробирку, осадок смолы промывают на центрифуге, промывные воды присоединяют к основному центрифугату, и раствор доводят до нужного объема.

Удаление бария в виде BaS04. Навеску бариевой соли гексозофосфата помещают в центрифужную пробирку, растворяют в 1—2

страница 21
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
курсы обслуживание кондиционеров
оптический sfp трансивер glc lh smd
Купить квартиру или апартаменты на метро Сухаревская
театр современник афиша

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(21.11.2017)