химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

,4 мл — для манометрических. Осадок суспендируют с помощью пипетки и переносят в маленький центрифужный стакан, где митохондрии осторожно растирают пестиком до гомогенного состояния.

К суспензии добавляют раствор альбумина до конечной концентрации 0,1% и хранят ее на льду.

2. ВЫДЕЛЕНИЕ МИТОХОНДРИЙ СЕРДЕЧНОЙ МЫШЦЫ

Реактивы:

1. КС1 — 0,9%-ный раствор (готовят на дистиллированной воде),

2. Сахароза — 0,3 М раствор, содержащий Ю-2 М ЭДТА (готовят на бидистиллированной воде), рН 7,5.

3. HCI — 1 н. и 0,1 н. растворы.

4. КОН — 1 н. и 0,1 н. растворы.

Для работы используют только что изолированное, не поврежденное сердце крысы, голубя или кролика К Сердце быстро переносят в стакан с ледяным раствором 0,9%-ного КО (около 50 мл), хорошо промывают его и окрашенный кровью раствор сливают. Процедуру повторяют еще дважды, стараясь по возможности полнее отмыть кровь, поскольку эритроциты содержат высокоактивную НАДазу и загрязнение гомогената кровью сказывается на результатах опытов. Отмытое сердце переносят на толстый слой фильтровальной бумаги, обсушивают и ножницами удаляют сосуды, соединительную ткань и жир. Желудочек вскрывают, из внутренней полости удаляют сгустки крови. Ткань еще раз ополаскивают ледяным раствором 0,9%-ным КО и, обсушив фильтровальной бумагой, помещают в чашку Петри, поставленную на мелко наколотый лед.

Мышцу взвешивают (~5 г) и измельчают ножницами до кашицеобразного (почти гомогенного) состояния. Кашицу переносят в гомогенизатор и добавляют 0,3 М раствора сахарозы с ЭДТА из расчета J0 мл раствора на 1 г сырой ткани. Ткань быстро (не более 1 мин) измельчают в стеклянном гомогенизаторе с тефлоновым пестиком до получения однородной массы. Гомогенат переносят в центрифужный стакан и центрифугируют при 600 g в течение 7 мин. С поверхности удаляют жир ватным тампоном и супернатант переносят в другой центрифужный стакан. Процедуру проводят осторожно, чтобы рыхлый слой осадка остался в первом стакане. Супернатант центрифугируют 15 мин при llOOOg. Надосадочную жидкость сливают, плотный осадок митохондрий осторожно растирают стеклянной палочкой в 2 мл раствора сахарозы с ЭДТА до гомогенного состояния. К суспензии добавляют раствор сахарозы с ЭДТА, до 40 мл и вновь осаждают митоСпособы эвтаназии животных обычные (см. с. 221).

хондрии при HOOOg в течение 15 м'ин. После удаления супернатанта

в стакан добавляют 2 мл раствора сахарозы с ЭДТА, поверхность

осадка ополаскивают легким встряхиванием центрифужного стакана.

Жидкость сливают, плотный осадок суспендируют в небольшом объеме

среды выделения (1,5 мл, концентрация белка 40—60 мг/мл) и хранят

в короткой пробирке (длина 3 см) на льду. *

ЛИТЕРАТУРА

1. Умбрейт В. В. и др. Манометрические методы изучения тканевого обмена. М., 1951.

2. Виноградов А. Д. Окисление сукцината и обратный транспорт электронов в дыхательной цепи. Автореф. дис. ... канд. биол. наук. М., 1968.

3. ВЫДЕЛЕНИЕ МИТОХОНДРИЙ ПЕЧЕНИ КРЫСЫ

Реактивы:

1. Среда выделения: 0,25 М раствор сахарозы, содержащий 0,001 М ЭДТА, рН 7,4.

2. Сахароза — 0,25 М раствор.

3. НС1 — 1 н. и 0,1 н. растворы.

4. КОН — 1 н. и 0,1 н. растворы.

Все реактивы готовят на бидистиллированной воде.

Изолированную печень погружают в 30 мл ледяной среды выделения. После двух-трехкратного промывания ткань измельчают ножницами на чашке Петри, стоящей на льду. Кашицу вновь помещают в стаканчик со свежей средой выделения и тщательно промывают. После оседания кусочков ткани на дно жидкость осторожно сливают и промывание повторяют еще дважды. Ткань переносят в гомогенизатор, добавляют 40 мл среды выделения и измельчают в течение 30— 40 с. К гомогенату добавляют 40 мл среды выделения, перемешивают медленно вращающимся пестиком и разливают его в два центрифужных стакана. Центрифугируют в течение 10 мин при 0—2° С при 600 g для удаления обломков клеток и ядерной фракции.

Супернатант осторожно сливают и хранят на льду, осадки объединяют и вновь гомогенизируют 20 с в 20 мл среды выделения. Гомогенат центрифугируют при 600 g 10 мин, супернатант объединяют с полученным ранее.

Для осаждения митохондрий объединенный супернатант центрифугируют в двух стаканах при 14000g в течение 10 мин. Осадки объединяют в одном стакане и тщательно суспендируют с помощью пипетки на 1 мл в небольшом объеме среды выделения (около 0,5 мл). Маленькими порциями при осторожном встряхивании добавляют 40 мл среды выделения и осаждают митохондрии (14000g, 10 мин). Осадок суспендируют в 0,25 М сахарозе, не содержащей ЭДТА, и вновь центрифугируют (14000g 10 мин). Супернатант сливают, на полученный осадок митохондрий осторожно наслаивают 0,2—0,3 мл 0,25 М сахарозы. Легким встряхиванием смывают верхний рыхлый слой осадка. Процедуру повторяют еще дважды и полученный плотный осадок митохондрий тщательно суспендируют с помощью пипетки в 0,4—0,5 мл 0,25 М сахарозы. Густею суспензию митохондрий переносят в пробирку и хранят на льду.

ЛИТЕРАТУРА

Johnson D, Lardy Н. Isolation of liver or kidney mitochondria//Metho

страница 207
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
металлический сайдинг под камень невинномысск
Casio G-Shock DW-5600SL-1E
шоу филиппа киркорова я
кипить билеты на сукачева 7 декабря

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(04.12.2016)