химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

— неполярного соединения. Результаты эксперимента свидетельствуют о том, что гидрофобные взаимодействия в молекуле миозина могут участвовать не только в поддержании определенной пространственной структуры белка, но и в регуляции его активности.

Защитное действие субстрата при воздействии на фермент модифицирующих реагентов

а. Защита миозиновой АТФазы аденозинтрифосфатом от потери активности под действием ДНФ(реактивы — см. с. 393). Описанная в предыдущей задаче активация миозина под действием ДНФ наблюдается только в случае, когда ДНФ присутствует в среде инкубации, т. е. одновременно с АТФ

(субстратом).

Растворы и условия постановки эксперимента аналогичны описанным в предыдущей задаче. Ставится четыре варианта проб:

1) три пробы для определения неорганического фосфата в среде инкубации (контроль);

2) три пробы для определения АТФазной активности в отсутствие ДНФ;

3) три пробы для определения АТФазной активности в присутствии ДНФ (ДНФ содержится в среде инкубации);

4) три пробы, в которых растворы фермента и ДНФ смешивались до добавления среды инкубации (т. е. время взаимодействия миозина с ДНФ в отсутствие субстрата будет составлять от 30 с до 1—2 мин).

Для удобства эксперимента желательно иметь раствор ДНФ с концентрацией 100 мМ, добавляя его по 0,1 мл или в среду инкубации (вариант 3), или к 0,1 мл раствора миозина (вариант 4). Для выравнивания объемов в первые 6 проб (варианты 1 и 2) следует добавить по 0,1 мл воды. Однако при такой постановке эксперимента, строго говоря, не обеспечиваются одинаковые условия взаимодействия фермента с модификатором в вариантах 3 и 4 из-за их концентраций в момент контакта и на первых этапах взаимодействия. Поэтому следует предусмотреть и такую постановку эксперимента, когда в варианте 4 алик-вота фермента (0,1 мл) разводится 0,5 М КС1 до 1 мл, затем сюда добавляется 0,1 мл раствора ДНФ и после 0,1 мл среды инкубации, в 10 раз более концентрированной, чем в трех первых вариантах. В результате эксперимента убеждаются в том, что: а) модифицирующий реагент (ДНФ) вызывает инактивацию фермента в отсутствие субстрата и что субстрат защищает фермент от инактивации; б) активирующее действие ДНФ на АТФазную активность миозина проявляется только в присутствии АТФ.

б. Защита миозиновой АТФазы аденозинтрифосфатом от модифицирующего влияния на нее ПХМБ.

Реактивы и условия постановки эксперимента аналогичны тем, которые описаны на с. 398.

Сравнивается АТФазная активность миозина в двух рядах проб. В первом ряду порядок смешивания растворов следующий: сначала к раствору миозина добавляется раствор ПХМБ, а после взаимодействия белка с модификатором, продолжающегося в течение 5 мин, добавляется инкубационная среда, содержащая АТФ. Время инкубации — 25—30 мин.

для второго ряда проб заготавливаются пробирки, в которых к 0,6 мл раствора инкубационной среды добавляются такие же, как и в первом ряду, количества раствора ПХМБ, а затем реакцию начинают, добавляя в каждую пробирку по 1,4 мл раствора миозина. Поскольку время инкубации (до 30 мин) значительно превышает время предварительного взаимодействия миозина с ПХМБ в первом ряду «дробирок, то различием во времени контакта белка и модификатора в двух первых сериях проб можно пренебречь. Одновременно следует удостовериться, что при взаимодействии с АТФ АТФазная активность миозина даже в присутствии ПХМБ стабильна и не меняется за все время проведения АТФазной реакции. Для этого в отдельном эксперименте определяют зависимость нарастания неорганического фосфата от времени в присутствии количеств ПХМБ, достаточных для 50—70%-ной модификации белка.

Принцип постановки эксперимента описан в разделе «Получение миозина и определение его АТФазной активности».

ЛИТЕРАТУРА 1. Торчинский Ю. М. Сера в белках. М., 1977.

2 Поглазов Б. Ф., Левицкий Д. И. Миозин и биологическая подвижность. М., 1982.

3. Гауровиц Ф. Химия и функция белков. М, 1965. С 36.

Раздел шестой

МЕТАБОЛИЗМ МИТОХОНДРИЙ. БИОЭНЕРГЕТИКА

Настоящий раздел практикума посвящен экспериментальным приемам, использующимся при изучении биоэнергетических механизмов тканей животных. Употребление понятия «биоэнергетика» применительно к данному разделу требует некоторых пояснений. Любую ферментативную реакцию можно характеризовать как с точки зрения химического механизма и скорости ее протекания, так и с позиций энергетики — установление констант равновесия отдельных стадий или суммарного процесса, непосредственно связанных с термодинамическими понятиями и величинами. Тем не менее, говоря о биоэнергетике, обычно подразумевают реакции, приводящие к эндергоническому образованию АТФ из АДФ и неорганического фосфата. К таким реакциям относятся дыхательное фосфорилирование, фотофосфорилирование и реакции субстратного фосфорилирования АДФ, связанные с гликолизом и протеканием цикла трикарбоновых кислот. В силу традиции исследования в области биоэнергетики на кафедре биохимии МГУ ограничены тканями животного происхождения. С количественной же точки зрения реакции дыхательн

страница 205
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
взять в аренду 4к панель
Компания Ренессанс п-образная лестница на второй этаж - цена ниже, качество выше!
стул для посетителей kf 1
Выгодное предложение в КНС Нева на сумки для ноутбука - от товаров до интеграции в Санкт-Петербурге!

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(10.12.2016)