химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

м протеолизе. Примерно такая же карта наблюдается и в случае субфрагмента-1, полученного методом папаинового протеолиза, однако подвижность одной из легких цепей может возрасти вследствие ее частичной деградации.

Сложную картину с большим числом полос наблюдают при электрофорезе препарата тяжелого меромиозина в присутствии додецилсульфата натрия. В этом случае представляет интерес сопоставить данные по электрофорезу препарата ТММ (тяжелого меромиозина) в диссоциирующих и в недиссоциирующих условиях. ТТативный электрофорез в этом случае проводят в трис-глициновом буфере (рН 8,9) на пластинах с 5%-ным разделяющим гелем и 2,5—3%-ньгм концентрирующим гелем. В этом случае препарат тяжелого меромиозина дает в основном одну полосу, расположенную недалеко от старта, с м. м. 350 000 Да. Это свидетельствует о том, что, несмотря на наличие многочисленных внутренних разрывов в полипептидных цепях, возникших в результате протеолиза, фрагменты цепей держатся вместе за счет нековалентного взаимодействия. При этом обеспечивается функциональная целостность структуры (сохранение АТФазной активности).

ЛИТЕРАТУРА

1. Поглазов Б. Ф., Левицкий Д. И. Миозин и биологическая подвижность. М, 1982.

2. Методы практической биохимии. М., 1978. С. 65.

3. Остер ман Л. А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот. М., 1981. С. 249.

4. О с терм ан Л. А. Хроматография белков и нуклеиновых кислот. М., 1985. С. 109.

2. РОЛЬ СУЛЬФГИДРИЛЬНЫХ ГРУПП И ГИДРОФОБНЫХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЙ В АТФАЗНОЙ АКТИВНОСТИ МИОЗИНА

Одним из методов выявления функционально значимых групп & ферментах является метод химической модификации. Как правило, эти группы обладают более высокой реактивностью, чем такие же группы, не входящие в активный центр или регуляторный участок. Благодаря этому в какой-то степени преодолеваются ограничения метода, связанные с его недостаточной специфичностью, и применение химической модификации оказывается достаточно эффективным подходом в целом ряде случаев. Для подтверждения специфичности модификации (т. е. для того, чтобы удостовериться, что модификация произошла в-активном центре или другом функционально значимом участке) пользуются критерием защиты от модификации или потери активности в присутствии субстрата или иного специфического лиганда.

На примере миозиновой АТФазы рассматривается случай химической модификации с помощью некоторых сульфгидрильных реагентов, доказывается участие SH-групп в регуляции активности миозина (SH-группы непосредственно в активный центр этого фермента не входят), а также устанавливается важная роль гидрофобных взаимодействий в осуществлении регуляторного влияния на АТФазную активность миозина. Демонстрируется также стабилизирующее действие АТФ на структуру активного центра миозина.

Миозин, будучи АТФазой, относится к числу так называемых энер-гопреобразующих ферментов, так как при его непосредственном участии осуществляется трансформация энергии химических связей в механическую работу. Для ферментов такого типа характерна тесная связь катализа с конформационными перестройками. За счет этого-возможна регуляция активности фермента путем воздействия на группы, не входящие непосредственно в активный центр, а также при воздействии на него веществ, влияющих на конформацию белка. Совершенно очевидно, что субстрат (АТФ) должен в большинстве случаев оказывать защитное действие, стабилизируя структуру в области активного центра.

Известно, что из 30—34 сульфгидрильных групп, обнаруживаемых в молекуле миозина (в расчете на 500 000 Да), для активности существенными оказываются 4 (по 2 на каждый активный центр). Несмотря на то что они не входят непосредственно в активный центр, их блокирование различными SH-реагентами приводит сначала к резкой активации, а затем к полному исчезновению АТФазной активности. Для активации оказывается необходимым наличие органического слабополярного фрагмента у модифицирующего вещества.

Активация миозиновой АТФазы может быть также достигнута путем внесения в среду инкубации неполярных или слабополярных органических растворителей, что свидетельствует о важной роли гидрофобных взаимодействий в осуществлении регуляции активности миозина.

Влияние модификации сульфгидрильных групп под действием ПХМБ на АТФазную активность миозина (или тяжелого меромиозина)

Реактивы:

1. ПХМБ—5-Ю-4 М раствор, рН 7,6—8,0.

2. АТФ: 4 мг/мл АТФ, 0,5 М КС1, 1 • 10~z М СаЫ2, 3,о— о мг/мл трис (рН раствора доводиICH до 7,6 после смешивания всех компонентов).

3. Трихлоруксусная кислота — 20%-ный раствор.

4. Реактивы для определения неорганического фосфата методом Фиске и Суббароу.

5. КС1 — 0,5 М раствор.

Готовят ряд пробирок (12 шт.), в которые разливают по 1,4 мл раствора миозина в 0,5 М КО, содержащего 0,8—0,9 мг/мл (для удобства сопоставления результатов раствор должен быть таким же, какой использовали для определения содержания сульфгидрильных групп методом спектрофотометрического титрования — см. с. 159).

Затем в каждую пробу с интервалами в 30 с (по секундомеру) добавляют соот

страница 203
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
Газовые котлы Viessmann Vitogas 100-F GS1D 84
купить билет на детский праздник свинка пепа
элитная сантехника москва
ручки для межкомнатных дверей большой выбор где купить

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(08.12.2016)