химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

нный

ФМН — флавинаденинмононуклеотид

ЭГТА — этиленгликольтетраацетат

ЗДТА — этилендиаминтетра ацетат

BES — HN — б«с(2-гидроксиэтил)-2-аминоэтансульфокислота

MES — 2(г4-морфолино)этансульфокислота

MOPS — 3- (М-морфолино)пропансульфокислота

PIPES — пиперазин-N, М'-бш>2-этансульфокислота

HEPES — М-2-гидроксиэтилпиперазин-№-2-этансульфокислота

ТЕМЕД — N, N, N', N'-тетраметилэтилендиамин

Раздел первый

УГЛЕВОДЫ И липиды

Экспериментальные приемы, применяемые в биохимии для изучения метаболизма, разнообразны. Исследования химических превращений проводятся на уровне целых органов, в тонких срезах и клеточных культурах, в гомогенатах тканей, органелл и очищенных ферментов. В любом эксперименте важную роль играют методы количественной регистрации химических превращений. Гравиметрические методы недостаточно чувствительны и часто непригодны для анализа органических соединений. Поэтому в биохимии широко применяются спектро-фотометрические и колориметрические методы, имеющие высокую чувствительность и позволяющие определять очень небольшие количества веществ. Некоторые превращения сопровождаются поглощением или выделением газа. Для количественной регистрации таких превращений применяются манометрические методы.

Первый раздел «Практикума» должен помочь студентам освоить методические приемы и основы аналитической биохимии. Он содержит описание основных принципов и методов концентрационного анализа, принятых в биохимии (спектрофотометрического, колориметрического, манометрического), в частности, для количественного определения гликогена, глюкозы, неорганического фосфата, фосфорных эфиров углеводов, молочной и пировиноградной кислот. В раздел включены работы, посвященные анаэробному превращению углеводов. Каждая задача, выполняемая студентом, предусматривает анализ чистоты исходного препарата углевода или его фосфорного эфира, получение ферментного препарата (гомогената или экстракта ткани), постановку биохимического эксперимента, количественную оценку результатов. Количественное определение веществ проводится несколькими методами, результаты сопоставляются. Так, выполняя задание по теме «Превращение фруктозо- 1,6-дифосфата в молочную кислоту», студент анализирует фруктозо-1,6-дифосфат по фруктозе и по фосфату, молочную кислоту определяет спектрофотометрическим и колориметрическим методами. Подобным образом выполняются работы, связанные с превращением других фосфорных эфиров углеводов, гликогена, глюкозы.

В раздел включены также задачи, знакомящие с методами выделения липидов из биологического материала, фракционированием их с помощью колоночной и тонкослойной хроматографии, с методами количественного определения.

I. МЕТОДЫ КОНЦЕНТРАЦИОННОГО АНАЛИЗА

1. ФОТОМЕТРИЧЕСКИЕ (СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКИЙ И КОЛОРИМЕТРИЧЕСКИЙ) МЕТОДЫ

Фотометрические методы основаны на общем законе светопоглощения Бугера—Ламберта—Бера, который определяет соотношение между интенсивностью падающего (/0) и прошедшего через поглощающий раствор (/) монохроматического излучения:

Величина характеризует степень ослабления интенсивности излучения после пропускания через раствор. Ее называют оптической плотностью раствора, или его экстинкцией, и обозначают буквой А (иногда D или Е). Закон отражает линейную зависимость А от концентрации поглощающего вещества С, толщины поглощающего слоя/, коэффициента поглощения (коэффициента экстинкции) е. При концентрации раствора 1 М и толщине поглощающего слоя 1 см е представляет собой коэффициент молярного поглощения. Он является основной характеристикой, отражающей способность вещества поглощать свет в определенном растворителе и при определенной длине волны. Чем больше величина е, тем выше чувствительность спектрофотометр ического метода определения вещества. Иногда пользуются коэффициентом удельного поглощения А1°1°1СМ, представляющим собой величину оптической плотности 1%-ного (масса/объем) раствора при длине пути света 1 см.

Величина оптической плотности А изменяется от 0 до сю. Однако на практике достаточная точность ее измерения возможна в интервале значений от 0,2 до 0,8. Градуировка шкал фотометрических приборов обычно осуществляется как в величинах Л, так и в величинах Т.

Т — отношение интенсивности излучения, прошедшего через поглощающий раствор, к интенсивности первоначального излучения. Это отношение называется пропусканием.

г = -^- = ю-еС/.

Величина Г, отнесенная к толщине поглощающего слоя в 1 см, называется коэффициентом пропускания.

Оптическая плотность А и пропускание Т связаны уравнением: А=—lg Т. Пропускание обычно измеряется в процентах и меняется от 0 до 100%. Если Т выражено в процентах, то Л=2—\gT%.

При определении концентрации вещества на спектрофотометрах обычно снимают отчеты по шкале оптических плотностей. Можно пользоваться шкалой процента пропускания, а затем пересчитывать полученные данные в единицах А. Концентрацию исследуемого вещества определяют по величине оптической плотности при известных ей/:

с-*

el

В качестве «нулевого» раствора

страница 2
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
mikasa в санкт-петербурге купить
ремонт холодильников филёвский парк
кухонные аксессуары
135731-03

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(03.12.2016)