химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

л молибденового реактива, перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 1 мин. Фотометрируют на приборе «Спекол» при 350 нм в кюветах с расстоянием между рабочими гранями, равным 1 см (?=1 см). Содержание фосфата в исследуемом растворе рассчитывают по калибровочному графику, построенному с использованием стандартного раствора фосфата, содержащего 0,4 мкмоль в 1 мл.

При работе на спектрофотометре (кювета: 1=1 см, V=3 мл) объем фотометрируемых проб и содержание в них фосфата удваивают, оставляя без изменения соотношение объемов раствора фосфата и молибденового реактива, равное 1 : 3. В этом случае определяют до 0,32 мкмоль фосфата в пробе.

При проведении определения на ФЭКе к раствору, содержащему от 0,05 до 0,6 мкмоль фосфата, приливают бидистиллированную воду до 0,6 мл, добавляют 1,8 мл молибденового реактива. Через 1 мин фотометрируют при 340 или 364 нм в кюветах с /=0,5 см. Для построения калибровочного графика используют стандартный раствор, содержащий 1 мкмоль фосфата в 1 мл.

9. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЛАБИЛЬНЫХ ФОСФОРНЫХ СОЕДИНЕНИИ

Лабильные фосфорные соединения неустойчивы в кислой среде и уже при комнатной температуре расщепляются с образованием неорганического фосфата, молибденовокислый аммоний резко ускоряет этот процесс. К таким соединениям относят все гуанидинфосфаты (креа-тинфосфат, аргининфосфат и др.), фосфорилированные производные имидазола, ацилфосфатьь При определении этих соединений из исследуемого раствора предварительно удаляют неорганический фосфат.

Фосфорная кислота в слабощелочной среде при избытке аммиака с ионами Mg2+ дает практически нерастворимый осадок аммониево-магниевой соли фосфорной кислоты:

Mg2+ + HP042-+NH4OH-MgNH4P04 + H20.

Осаждение неорганического фосфата проводят магнезиальной смесью. Магнезиальный фильтрат используют для определения лабильного фосфата.

Реактивы:

1. Магнезиальная смесь — 20 г MgCl2-6H20 и 40 г NH4C1 растворяют в 200 мл воды и добавляют 20 мл концентрированного аммиака.

2. Фенолфталеин — 0,5%-ный спиртовой раствор.

3. КОН — 10%-ный раствор.

4. СС13СООН — 5%-ный раствор или НСЮ4 —5%-ный раствор.

5. Реактивы для определения неорганического фосфата методом Фиске—Суббароу (с. 34).

Осаждение белков из исследуемого раствора проводят на холоде равным объемом 5%-ного раствора CCI3COOH (или НСЮ4). Осадок белка сразу удаляют фильтрованием или центрифугированием. Из безбелкового раствора быстро отбирают пробу и вносят в 1,5-кратный объем магнезиальной смеси, предварительно налитой в пробирки, стоящие во льду. Проверяют реакцию среды, добавляя в пробы по капле фенолфталеина. Реакция среды должна быть щелочной (розовое окрашивание с фенолфталеином). После тщательного перемешивания пробирки оставляют во льду на 30—40 мин, периодически их встряхивая. Образовавшийся осадок аммониевомагниевой соли фосфорной кислоты удаляют фильтрованием.

Из магнезиального фильтрата отбирают аликвоту, учитывая чувствительность колориметрического метода, пробу нейтрализуют 0,2 н. НС1, добавляют молибденовый реактив (1,5 мл) и рабочий раствор эйконогена (1 мл). Объем пробы доводят до 5 мл. Содержимое пробирок хорошо перемешивают и оставляют при 37°С не менее чем на 30 мин. Затем пробы охлаждают и фотометрируют. По калибровочному графику рассчитывают содержание лабильного фосфата.

10. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФОСФОТРИОЗ (ГЛИЦЕРАЛЬДЕГИД-З-ФОСФАТА И ДИОКСИАЦЕТОНФОСФАТА)

Фосфотриозы (щелочнолабильные соединения) в 1 н. растворе щелочи уже при комнатной температуре распадаются с отщеплением неорганического фосфата. Таким образом, количество образовавшегося при щелочном гидролизе фосфата соответствует количеству фосфо-триоз.

Реактивы:

1. Реактивы для определения неорганического фосфата (с. 34).

2. КОН или NaOH —2 н. раствор.

3. НС1 или H2S04 — 2 н. раствор.

Для определения фосфотриоз берут 2 серии пробирок. В одну серию (опытную) отбирают заранее рассчитанное количество безбелкового фильтрата, например 0,75 мл, добавляют равное количество 2 н. раствора щелочи, т. е. также 0,75 мл, и все тщательно перемешивают. Пробирки оставляют при комнатной температуре на 30 мин. Затем в них добавляют по 0,75 мл 2 н. раствора кислоты и по 0,25 мл воды. В другую (контрольную) серию пробирок вначале наливают по 0,75 мл 2 н. щелочи, по 0,75 мл кислоты и только после этого по 0,75 мл безбелкового фильтрата и 0,25 мл воды. В пробирки обеих серий приливают по 1,5 мл молибденового реактива и 1,0 мл раствора эйконогена, все хорошо перемешивают, оставляют пробы при комнатной температуре и через 30 мин фотометрируют.

По разности в количестве неорганического фосфата в первой и второй серии проб рассчитывают содержание фосфотриоз.

11. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГЛЮКОЗО-1-ФОСФАТА (ЛЕГКОГИДРОЛИЗУЕМЫХ В КИСЛОТАХ ФОСФОРНЫХ СОЕДИНЕНИИ)

Глюкозо-1-фосфат принадлежит к легкогидролизуемым в кислотах фосфорным соединениям. При нагревании в кипящей водяной бане в течение 10 мин в 1 н. растворе сильной кислоты он полностью расщепляется с образованием неорганического фосфата. Такими же свойствами обладают АТФ (отщеп

страница 19
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
соединитель мягкий сом цены
электропривод заслонки вентиляции
ручка-скоба
планшет для тренера по баскетболу

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(29.06.2017)