химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

ия НАДФ. Показания прибора регистрируют после доведения реакции до конца.

Состав реакционной среды объемом 3 мл: трис-HCl буфер 50 мМ, рН 7,5; НАДФ — 1 мМ, дегидрогеназа глюкозо-6-фосфата — 1 инт. ед. в пробе, супернатант, содержащий глюкозо-6-фосфат, — 0,5—1 мл.

Расчет активности фермента во всех случаях проводят на основании величин начальной скорости реакции при условии наличия прямой пропорциональной зависимости скорости реакции от количества ферментного препарата в пробе, Скорость фермента выражают в микромолях превращенных субстратов за 1 мин на 1 мг микросомального белка или на 1 г ткани.

изучение свойств фермента

1. В полученных разными методами препаратах микросом определяют содержание белка, учитывая, что теоретический выход препаратов по белку составляет 20—30 мг на 1 г ткани.

2 Определяют гидролазную активность фермента в полученных разными методами препаратах микросом в день выделения и после хранения. Перед определением активности фермента в неактивированных мембранных препаратах суспензию микросом разводят сахарозой в Ъ раз.

В дальнейшей работе используют препараты микросом, полученные методом низкоскоростного центрифугирования (Са-микросомы).

3. Исследуют влияние детергентов — тритона Х-100 и дезоксихолата натрия —на гидролазную активность глюкозо-б-фосфатазы. Для активации фермента используют детергенты в концентрациях 0,01— 0,5%; время инкубации — 1—10 мин. Дальнейшую работу проводят с активированными препаратами микросом в оптимальных условиях (химическая природа и концентрация детергента; температура и время его действия).

4 Определяют трансферазную активность глюкозо-6-фосфатазы

по схеме, представленной в пп. 2 и 3. 4

5. Используя активированные препараты \шкросом, исследуют зависимость скорости гидролазной и трансферазнон реакций от концентрации соответствующих субстратов: глюкозо-б-фосфата 1—20 мМ, глюкозы — 40—200 мМ, пирофосфата — 1—20 мМ. Рассчитывают значения Кт по субстратам, используя различные графические методы.

6. Исследуют влияние 40 и 90 мМ глюкозы на скорость гидролазной реакции в диапазоне концентраций глюкозо-б-фосфата 1—6 мМ. Рассчитывают значение Kt по ингибитору.

ЛИТЕРАТУРА

1. Ньюсхолм Э., Старт К. Регуляция метаболизма. М.., 1977. И. Мэдди Э. Биохимическое исследование мембран. М., 1979.

3 Nordle R С Glucose-6-phosphatase-phosphotranspherase: Roles and regulation in relation to gluconeogenesis//GIuconeogenesis; its regulation in mammalian species. N. Y.; L., 1976. P. 93.

4. Nordle R. C. et al. Biological regulation of liver microsomal glucose-6-phosphata-se//J. Biol. Chem. 1968. Vol. 243, N. 6. P. 1140.

5 Nordle R. C. Multifunctional gIucose-6-phosphatase' cellular biology//Life Sci. 1979. Vol. 24, N 26. P. 2397.

? Helenius A., Simons K- Solubilization of membranes by detergents//Biochim. Biophys. Acta. 1975. Vol. 415, N 1. P. 29.

7. Nordle R. C. Fine turning of blood glucose concentrations//Trends Biochem. Soc. 1985. Vol. 10, N 2. P. 70.

4. ИЗМЕНЕНИЕ СВОЙСТВ ГЕКСОКИНАЗЫ ПРИ СВЯЗЫВАНИИ С МЕМБРАНАМИ

При решении вопросов об особенностях функционирования и регуляции активности ферментов in vivo существенно важным следует считать влияние внутриклеточных структур, например мембран, на характер проявления каталитических свойств ферментов. Для целого ряда ферментов установлена способность к изменению внутриклеточной локализации вследствие существования динамического равновесия между связанной с мембранами и свободной формами ферментов. В результате нековалентной адсорбции на мембране возможны конформа-ционные изменения ферментов, сопровождающиеся модификацией кинетических свойств, а следовательно, и каталитической эффективности.

Указанные положения составляют основу современной концепции адсорбционного механизма регуляции активности ферментов в клетке, в том числе и гексокиназы тканей млекопитающих.

Гексокиназа (АТФ: D-гексозо-б-фосфотрансфераза, КФ 2.7.1.1) катализирует реакцию трансфосфорилирования между Mg—АТФ и гек-созами с образованием фосфорных эфиров гексоз и Mg—АДф:

Mg—АТФ2~-ь?>-гексоза ->-Mg—АДФ~ + ?)-гексозо-6-фосфат2- + Н+.

Открывая первый этап в метаболизме глюкозы —ее фосфорилирование, гексокиназная реакция занимает ключевое положение по отношению к важнейшим путям обмена углеводов: гликолизу, биосинтезу гликогена и пентозофосфатному пути. Реализация функции ключевого фермента во многом зависит от способности гексокиназы к взаимодействию с митохондриальными мембранами.

Адсорбционный механизм регуляции активности гексокиназы скелетной мышцы (II изозим гексокиназы) реализуется в повышении каталитической эффективности фермента вследствие нековалентной иммобилизации на митохондриальных мембранах. Связанная форма фермента по сравнению со свободной обладает большим числом оборотов, повышенным сродством к субстрату глюкозе и менее чувствительна к ингибирующему действию продукта реакции глюкозо-б-фосфата. Связь фермента с наружной митохондриальной мембраной осуществляется преимущественно с участием фосфолипидного компо

страница 189
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
курсы начинающему бухгалтера в зеленограде
В магазине КНС Нева онлайн кредит на планшет - в кредит не выходя из дома в Санкт-Петербруге, Пскове, Мурманске и других городах северо-запада России!
пенал compass эм-3.1
моноколесо экодрифт х5

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(04.12.2016)