химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

. Реакцию начинают внесением шрепарата плазматических мембран объемом 20 мкл и ведут в течение 20 мин. Определение активности АЦ в присутствии катехоламинов и гуаниловых нуклеотидов проводят также в объеме 50 мкл, смешивая 20 мкл смеси R, 5 мкл изопроте-ренола (10^5 М) и 5 мкл ГИДФ (10~7—10~4 М). Реакцию начинают внесением препарата белка и проводят в течение 30 мин. Строят графики зависимости активности фермента от концентрации ГИДФ. Из полученных графиков определяют кажущиеся константы активации.

Для изучения скорости активации АЦ проводят реакцию в пробах объемом 50 мкл в течение различных промежутков времени (0— 40 мин). Инкубацию проводят в аналогичных условиях в присутствии ГИДФ (10~5 М). Для изучения влияния катехоламинов на активацию АЦ в соответствующие пробы вносят ГИДФ (10~5 М) и изопротеренол (Ю-5 М). Гуаниловые нуклеотиды активируют фермент медленно, что приводит к появлению лаг-фазы на графике временной зависимости образования продукта реакции. Изопротеренол увеличивает скорость активации фермента, что приводит к уменьшению лаг-фазы. Ее длительность определяют по пересечению линейного участка графика временной зависимости образования продукта с осью абсцисс.

ЛИТЕРАТУРА

1. Воейков В. Л. Сопряжение рецепторов гормонов и нейромедиаторов с адени-латциклазой//Итоги науки и техники. Сер. биоорганическая химия/Под ред. Ю. А. Овчинникова. М., 1984. Т. 2. С. 172.

2. Ткачук В. А., Авдонии П. В. Изучение механизмов активации аденилатциклазы сердца адреналином н ионами фтора//Биохимия. 1977. Т. 42, Ш 11. С. 2005.

3. Counis R., Mongongu S. Adenylate cyclase assay with y—32P ATP as sub-strate//Analyt. Biochem. 1978. Vol. 84, N 1. P. 179.

4. Рогинский С. 3., Шноль С. Э. Изотопы в биохимии. М., 1963.

3. МОДУЛЯЦИЯ АКТИВНОСТИ ГЛЮКОЗр-6-ФОСФАТАЗЫ нид ДЕЙСТВИЕМ ДЕТЕРГЕНТОВ

Глюкозо-6-фосфатаза (D-глюкозо-б-фосфогидролаза, КФ 3.1.3.9) является терминальным ферментом глкжонеогенеза. Фермент мульти-функционален, поскольку способен не только катализировать ^гидролиз глкжозо-6-фосфата и других фосфорсодержащих соединений, но и осуществлять синтез глюкозо-б-фосфата из глюкозы, используя в качестве донора фосфатной группы целый ряд метаболитов, физиологически важными из которых являются пирофосфат и карбамоилфосфат:

1) глюкозо-6-фосфат + Н20 гидролаза->- глюкоза + Фн;

2) глюкоза + пирофосфат трансфераза->- глюкозо-6-фосфат + Фн.

В связи с этим уникальным свойством фермента в настоящее время обсуждается его физиологическая роль в системе, регулирующей уровень сахара крови. Фермент высокоактивен в печени и почках млекопитающих. Основное место локализации в клетке — микросомаль-ные мембраны.

Глюкозо-6-фосфатаза — интегральный белок микросомальных мембран. Активный центр фермента обращен внутрь везикул, поэтому для полного выявления его активности и изучения кинетических свойств необходима обработка мембранного препарата поверхностноактивными веществами — детергентами. Детергенты представляют собой специальную группу липидов, относящихся к классу растворимых амфифиль-ных соединений, т. е. соединений, имеющих в своей структуре как гидрофильные, так и гидрофобные участки. В зависимости от пространственной структуры, соотношения гидрофильной и гидрофобной зон, наличия заряженных групп детергенты обладают различным характером действия на биологические мембраны: от мягкого, вызывающего лишь дезориентацию структурных компонентов мембран, до значительно выраженной их солюбилизации и растворения мембран.

В зависимости от целей эксперимента в каждом конкретном случае выбирается не только определенный тип детергента, но также подбираются оптимальные условия его действия в отношении мембранного фермента (концентрация, время и температура обработки, количество мембранного материала) При выборе оптимально действующей концентрации детергентов следует помнить, что в определенных условиях они склонны к образованию агрегатов — мицелл, эффективность действия которых отличается от эффективности мономерных форм детергентов. Концентрация, выше которой происходит образование ми-целлярной формы детергентов, называется критической концентрацией мицеллообразования (ККМ). Так, для неионного детергента тритона Х-100 (м. м =643 Да) и анионного детергента дезоксихолата натрия (м. м. = 420 Да) величины ККМ соответственно равны 0,24 и 5 мМ.

В задачу работы входит знакомство с особенностями ферментных препаратов, являющихся интегральными компонентами мембран, а также изучение гидролазной и трансферазной активности глюкозо-6-фосфатазы микросомальных мембран печени крысы с целью оценить реальность их участия в механизме регуляции уровня сахара крови.

Реактивы^

1. Сахароза — 0,25 М раствор.

2. Малеатный буфер — 100 мМ раствор, рН 6,5.

о. 1риоп^1 oytpep — t>u мм раствор, рН 7,5; 150 мМ раствор, рН 8,0.

4. Глюкозо-6-фосфат — 20 мМ раствор на малеатном буфере, рН 6,5.

5. Глюкоза — 0,54 М раствор на малеатном буфере, рН 6,5.

6. Пирофосфат натрия — 150 мМ раствор на малеатном буфере, рН 6,5

7. Реактивы для определения Фн

страница 187
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
ромашки купить букет
дешевая сигнализация с автозапуском
юрист коллегия адвокатов в москве
курсы визажиста

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(08.12.2016)