химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

осфат.

Реактивы: см. определение неорганического фосфата методом Фиске—Суббароу (с. 34).

К исследуемому раствору, содержащему 0,2—2 мкмоль фосфата, Приливают дистиллированную воду до 4,3 мл, добавляют 0,5 мл молибденового реактива и 0,2 мл основного раствора эйконогена. Одновременно ставят контрольные пробы с дистиллированной водой (4,3 мл), которые обрабатывают, как указано выше. Содержимое всех лробирок перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 20 мин. Затем пробы тотчас же фотометрируют при 625—650 нм. При *более длительном времени выдерживания с молибденовым реактивом происходит гидролиз легкогидролизуемых фосфорных соединений. Содержание фосфата в исследуемом растворе рассчитывают по калибровочному графику.

Для построения калибровочного графика берут несколько проб с различными количествами стандартного раствора (от 0,2 до 2 мкмоль фосфата), которые обрабатывают, как указано выше.

МЕТОД САМНЕРА

Метод позволяет определить от 0,05 до 0,5 мкмоль неорганического фосфата в пробе В качестве восстановителя используется сульфат зкелеза.

2*

35

Реактивы:

1. (NH4)2Mo04 —6,6%-ный раствор.

2. H2S04 — 7,5 н. раствор.

3. Раствор сульфата железа — 1 г FeS04-7H20 растворяют в 10 мл Н20 и добавляют 0,2 мл 7,5 н. раствора H2S04. Раствор готовят непосредственно перед употреблением.

4. Стандартный раствор фосфата (КН2Р04), содержащий 0,5 мкмоль фосфата в 1 мл.

К исследуемому раствору, содержащему 0,05—0,5 мкмоль фосфата, приливают дистиллированную воду до 3,6 мл, добавляют 0,5 мл 6,6%-ного раствора молибдата аммония, 0,5 мл 7,5 н. раствора H2S04 и 0,4 мл раствора сульфата железа. Пробы перемешивают, оставляют при комнатной температуре на 40 мин, после чего фотометрируют при 625 нм. Так же обрабатывают пробы стандартного ряда.

МЕТОД РАТБУНА И БЕТЛАХ

Метод позволяет определить от 0,02 до ОД мкмоль неорганического фосфата в пробе. В качестве восстановителя используется хлористое олово. Проведение реакции в буферном растворе при рН 3,4 и введение в реакционную среду формальдегида позволяют определять неорганический фосфат в присутствии АТФ и веществ, имеющих сульф-гидрильные группы. Чтобы уменьшить возможность гидролиза лабильных фосфорных эфиров, рекомендуется добавлять в буферную среду этанол до конечной концентрации 10% в измеряемых пробах.

Реактивы:

1. (NH4)2Mo04 — 2%-ный раствор.

2. Натрий-ацетатный буфер — 3 М раствор, рН 4,3, содержащий 3,7% формальдегида.

3. Хлористое олово — 6,75 мМ свежеприготовленный раствор (15 мг SnCl2 растворяют в 0,04—0,05 мл ледяной уксусной кислоты, объем раствора доводят водой до 10 мл).

4. Стандартный раствор фосфата (КН2Р04), содержащий 0,1 мкмоль фосфата в 1 мл.

К исследуемому раствору, содержащему 0,02—0,1 мкмоль неорганического фосфата, приливают дистиллированную воду до 1,6 мл, прибавляют 1,1 мл 3 М Na-ацетатного буфера, рН 4,3, содержащего 3,7% формальдегида. К каждой пробе последовательно с интервалом 1 —1,5 мин добавляют по 0,1 мл 2%-ного раствора молибдата аммония и сразу же после интенсивного перемешивания 0,2 мл 6,75 мМ раствора хлористого олова. Окраска развивается в течение 15 мин при 20° С. Пробы фотометрируют при 660 нм. При добавлении в буферную среду этанола окраска развивается до постоянных значений через 45 с. Так же обрабатывают пробы стандартного ряда.

Метод Ратбуна и Ветлах в модификации позволяет проводить определение неорганического фосфата в присутствии белка, если его содержание в измеряемых пробах не превышает 50 мкг. В этом случае к 1 мл исследуемого раствора прибавляют 1 мл 3 М Na-ацетатного буфера, рН 4,3, содержащего 3% формальдегида. Затем добавляют по 0,1 мл 2%-ного раствора молибдата аммония и 0,1 мл 13,5 мМ раствора хлористого олова (15 мг SnCl2 растворяют в 4—5 каплях ледяной

СН3СООН и доводят объем водой до 5 мл). Окраска развивается в течение 15 мин при 20° С.

МЕТОД БЕНЦИНИ

Метод позволяет определить от 0,02 до 0,16; 0,32 или 0,6 мкмоль неорганического фосфата в пробе в зависимости от прибора, используемого при фотометрировании. Основан на измерении интенсивности поглощения света при 350 нм комплексом, образованным фосфатом и молибдатом в присутствии двухвалентного иона цинка. Коэффициент молярного поглощения при 350 нм равен 7,2-103 М-1 см-1. Реакцию образования комплекса проводят при рН 5,0, что дает возможность определить неорганический фосфат в присутствии лабильных фосфорных соединений. Метод отличается быстротой выполнения.

Реактивы (готовят на бидистиллированной воде):

1. НО — 6 н. раствор.

2. Молибденовый реактив — 15 мМ раствор (NH4)2Mo04, приготовленный на 100 мМ растворе ацетата цинка; рН полученного раствора доводят до 5,0 6 н. раствором НС1. Реактив хранят при комнатной температуре в защищенном от прямого солнечного света месте.

3. Стандартный раствор фосфата (КН2Р04), содержащий 0,4 мкмоль фосфата в 1 мл или 1 мкмоль фосфата в 1 мл.

К раствору, содержащему от 0,02 до 0,16 мкмоль неорганического фосфата, приливают бидистиллированную воду до 0,4 мл, добавляют 1,2 м

страница 18
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
сроки компьютерные курсы в москве
линзы цветные okvision infiniti
экран в аренду в москве
кпд-2-с 300х300 h l-ble 220 оц вн к

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(07.12.2016)