химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

ия-оттаивания. С этой целью суспензию нативных митохондрий замораживают при температуре — 20 °С с последующим размораживанием при комнатной температуре,

5. Исследуют возможную локализацию аспартатаминотрансферазы в митохондриях печени: х\

а) на наружной стороне внешней мембраны. Обрабатывают митохондрии раствором высокой ионной силы с целью солюбилизировать

фермент (перевести в растворенное состояние) с мембраны. Осадок

нативных митохондрий суспендируют в 1 М КО. После определения

активности фермента в полученной суспензии ее центрифугируют при

10 000g в течение 10 мин. Определяют активность фермента в осадке

митохондрий, предварительно суспендировав его в 1 М КО, и в супернатанте.

б) в межмембранном пространстве. Создают условия для гипоосмотического «шока» митохондрий. С этой целью осадок нативных митохондрий суспендируют в дистиллированной воде и центрифугируют

при 10 000 g в течение 10 мин. Определяют активность фермента в супернатанте и в осадке митохондрий, предварительно суспендировав

его в воде Полученные данные сравнивают с величинами активности

фермента в суспензии нативных митохондрий (в 0,25 М сахарозе) и

после гипоосмотического «шока» (в воде).

в) в матриксе. Активность фермента определяют после деструктивного воздействия дигитонина на суспензию митохондрий, подвергнутых гипоосмотическому «шоку» (см. п. 3). Детергент используют в

дозах 0,1 — 1 мг на 1 мг белка митохондрий.

Наряду с активностью аспартатаминотрансферазы в каждом случае определяют активность малатдегидрогеназы — маркерного фермента матрикса митохондрий.

При дозах детергента 0,3 и 0,5 мг на 1 мг белка митохондрий действие дигитонина исследуют также в присутствии 1 М КО. В случае адсорбции фермента на внутренней мембране митохондрий под действием КО возможна эффективная солюбилизация аспартатаминотрансферазы. Это можно установить, определив активность фермента в супернатанте после центрифугирования обработанной суспензии при 20 000g в течение 20 мин.

6. Для фермента растворимой клеточной фракции и солюбилизи-рованного из митохондрий исследуют профиль рН-зависимости активности в диапазоне изменений рН 6,5—9,0. Вследствие замены фосфатного буферного раствора трис-HCl буфером в области изменения рН 7,5—8,0 определение активности фермента проводят в обеих буферных системах. При интерпретации полученных данных делают поправку с учетом влияния состава буферной системы на активность фермента.7. Для изозимов аспартатаминотрансферазы исследуют зависимость скорости реакции от концентрации L-аспартата: 1 — 10 мМ — для цитоплазматического и 0,1 — 1 мМ — для митохондриального изозима, а также от концентрации а-кетоглутарата: 0,2—2 мМ — для цитоплазматического и 0,3—3 мМ — для митохондриального изозима. В каждом случае субстрат, содержание которого не меняется, берется в насыщающей концентрации.

Графическими методами оценивают значения Кт по соответствующим субстратам.

ЛИТЕРАТУРА

1. Диксон М., Уэбб Э. Ферменты. М., 1982. Т. 1.

2. Диксон М., Уэбб Э. Биология ферментов//Ферменты. М., 1983. Т. 3. С. 887.

3. Яковлева В. И. Изоферменты//Усп. биол. хим. М., 1968. Т. 9. С. 55.

4. Уилкинсон Дж. Аспартатаминотрансфераза/уИзоферменты. М., 1968. С. 143.

5. Катунума Н. Роль изоэнзимов трансаминаз в обмене веществ//Химия и биология пиридоксалевого катализа. М., 1968. С. 155.

6. Boyd J. W. The extraction and purification of two isoenzymes of Z.-aspartate.2-oxo-glutarate aminotransferases//Biochim. Biophys. Acta. 1966. Vol. 113, N 2. P. 302.

7. M a 11 i b M. A., O'Brien P. J. Compartrnentation of enzymes in the rat liver mitochondrial matrix//Arch. Biochem. Biophys. 1975. Vcl. 167, N 1. P. 192.

6. АЛЛОСТЕРИЧЕСКАЯ РЕГУЛЯЦИЯ АКТИВНОСТИ ФРУКТОЗО-1,6-ДИФОСФАТАЗЫ

При изучении регуляции альтернативных метаболических путей,, таких как гликолиз и глюконеогенез, большое значение придается ключевым реакциям, некоторые участники которых являются общими интермедиатами указанных метаболических путей. К числу таких химически различных альтернативных реакций относятся, например, фосфофруктокиназная и фруктозо-1,6-дифосфатазная реакции гликолиза и глюконеогенеза соответственно. Указанные реакции катализируют так называемый субстратный цикл обратимого превращения фруктозо-6-фосфата во фруктозо-1,6-дифосфат, протекающего с затратой одной молекулы АТФ.

Скорость превращения веществ в альтернативных метаболических путях, а значит и их предпочтительная направленность решающим образом зависят от особенностей функционирования ферментов субстратного цикла. Для таких ферментов характерна, как правило, реци-прокная регуляция с участием аллостерических эффекторов. В случае рассматриваемого субстратного цикла эффекторами являются АМФ — ингибитор фруктозо-1,6-дифосфатазы и активатор фосфофруктокиназы, а также цитрат-ион, являющийся активатором фруктозо-1,6-дифосфатазы и ингибитором фосфофруктокиназы.

Цель задачи заключается в изучении регуляторных свойств фрук-тозо-1,6-дифосфатазы печени крысы как фермента-участника субстратного

страница 178
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
утеплитель минвата 50мм цена
благодарственное письмо директору школы от родителей текст
металлические шкафы архивные
квн москва купить билеты

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(24.09.2017)