химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

нцини (с 37)

Удаление белков. Белки из исследуемого раствора осаждают трихлоруксусной или хлорной кислотой, добавляя ее к раствору до конечной концентрации 2,5%. Раствор хорошо перемешивают, осадок белка удаляют фильтрованием или центрифугированием. Если в растворе присутствуют кислотолабильные фосфорные соединения, то фильтрование или центрифугирование проводят на холоде, а кислоту из безбелкового раствора удаляют. От трихлоруксусной кислоты можно освободиться путем повторного встряхивания раствора с 5— 10-кратным объемом насыщенного водой эфира. Трихлоруксусная кис2 Зак 416

33

лота переходит при этом в эфирную фракцию. После встряхивания и? отстаивания эфир отсасывают водоструйным насосом Хлорную кислоту удаляют в виде калиевой соли (КСЮ4), образующейся при нейтрализации раствора 5 н. растврром КОН, как указано на с. 29. Вместо удаления кислот безбел^ковый раствор можно просто нейтрализовать раствором NaOH. При этом необходимо определить конечный объем пробы.

Неорганический фосфат определяют прямо из полученного безбелкового раствора. Безбелковые растворы фосфорных эфиров углеводов подвергают дополнительной обработке для отщепления ортофос-фата (см. Приложение, с. 496).

По устойчивости в кислых и щелочных растворах фосфорсодержащие соединения могут быть подразделены на следующие группы:

1) лабильные фосфорные соединения — легко распадаются в кислой среде при комнатной температуре; расщепление резко ускоряется в присутствии молибденовокислого аммония;

2) легкогидролизуемые в кислоте фосфорные соединения — полностью гидролизуются за 7—10 мин в 1 н. растворе НС1 при 100° С;

3) щелочнолабильные фосфорные соединения — расщепляются в 1 н. щелочи при комнатной температуре;

4) легкогидролизуемые в щелочной среде фосфорные соединения — расщепляются в 0,2 н. щелочи при 100° С за 10 мин;

5) трудногидролизуемые фосфорные соединения — в кислых и щелочных растворах даже при 100° С в течение длительного времени подвергаются лишь слабому гидролизу.

МЕТОД ФИСКЕ—СУББАРОУ

Метод позволяет определить от 0,2 до 2 мкмоль неорганического фосфата в пробе. В качестве восстановителя в этом методе используют систему эйконоген (сс-1,2,4-аминонафтолсульфоновая кислота)-сульфит, кислотность 0,75 н.

Реактивы:

1. (NH4)2Mo04—- 2,5%-ный раствор.

2. H2S04— 5 н. раствор.

3. Молибденовый реактив — смесь равных объемов молибденовокислого аммония (1) и серной кислоты (2).

4. Эйконоген (а-1,2,4-аминонафтолсульфиновая кислота)

Очистка эйконоген а. В 1 л. дистиллированной воды, нагретой до 90° С, растворяют 15 г NaHS03(Na2S205) и 10 г Na2S03.

Затем при постоянном помешивании растворяют 15 г эйконогена

(температура раствора — 90° С) и фильтруют горячим через воронку с нагреванием. Фильтрат охлаждают, добавляют к нему

10 мл концентрированной НС1, перемешивают и фильтруют на

воронке Бюхнера. Осадок промывают 300 мл охлажденной до

0° С дистиллированной воды, а затем спиртом. Промывают спиртом до тех пор, пока фильтр не станет бесцветным. Осадок высушивают на воздухе в темном месте. Хранят эйконоген в темной

склянке.

Основной раствор: 250 мг эйконогена, 15 г NaHS03 (или Na2S205, 14 г) и 0,5 г Na2S03 растворяют в 100 мл воды. Рабочий раствор эйконогена: 1 объем основного раствора и 4 объема дистиллированной воды, хорошо перемешивают, если

"необходимо фильтруют. Раствор может храниться в темноте несколько дней. Очистку эконогена см. выше.

5. Стандартный раствор фосфата (KH2P04), содержащий 2 мкмоль фосфата в 1 мл. В качестве антисептика к раствору добавляют 1—2 капли хлороформа.

К раствору, содержащему от 0,2 до 2 мкмоль фосфата, добавляют дистиллированную воду до 2,5 мл и 1,5 мл молибденовой смеси; содержимое пробирок хорошо перемешивают. Затем во все пробы добавляют по 1 мл рабочего раствора эйконогена, все снова перемешивают И, ставят в водяной термостат при 37°С на 10—15 мин или оставляют при комнатной температуре на 30—40 мин. После этого раствор •охлаждают и фотометрируют при 625 нм.

Содержание фосфата в пробе рассчитывают по калибровочному графику. Для построения графика проводят определение фосфора в стандартном растворе КН2Р04, беря различные его количества в пределах чувствительности данного метода, а именно от 0,2 до 2 мкмоль фосфата в пробе для колориметрирования (5 мл). Если в исследуемом растворе присутствуют лабильные фосфорные соединения, то поступают следующим образом. Определяют содержание фосфата в исходном безбелковом растворе айв том же растворе после осаждения из него неорганического фосфата магнезиальной смесью б (с. 38). По разности количества фосфата, найденного в пробах (а—б), рассчитывают количество неорганического фосфата в исследуемом растворе.

МЕТОД ХЕРСА

Метод Херса представляет собой модификацию метода Фиске— Суббароу. Благодаря небольшому снижению кислотности (0,25 н.) он позволяет определить неорганический фосфат * в присутствии легко-гидролизуемых в кислой среде фосфорсодержащих соединений, таких, жак АТФ, АДФ, глюкозо-1-фосфат, неорганический пироф

страница 17
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
Посуда Французская официальный сайт
5981130
обучение инженер холодильного оборудования
столбик парковочный анкерный спа-1

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(29.03.2017)