химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

р.

5. КОН — 5 н. раствор.

6. Раствор натриевой соли пировиноградной кислоты.

Метод предварительно отрабатывают со стандартным раствором пировиноградной кислоты или ее соли. Количество пировиноградной кислоты, которое необходимо внести в кювету спектрофотометра для измерения, рассчитывают по формуле (с. 7).

Содержимое опытной кюветы хорошо перемешивают и измеряют оптическую плотность при 340 нм до тех пор, пока показания не выйдут на плато (А\). Только после этого в опытную кювету добавляют %\ мл исследуемого раствора и перемешивают. Вновь измеряют оптическую плотность опытной кюветы до выхода на плато (Л2). Рассчитывают количество пировиноградной кислоты по формуле (см. с. 7), где Аз4о=А\—Л2; учитывая все разведения.

t ' 15 Длительное выделение углекислого газа возможно также, если в растворе Присутствуют кетоглутаровая или щавелевоуксусная кислоты. Эти кислоты под влия-1ВДем дрожжевого экстракта декарбоксилируются, но со значительно меньшей скоростью. Если количество этих кислот небольшое, то их декарбоксилирование можно исключить уменьшением количества дрожжевого экстракта.

С

При определении содержания пировиноградной кислоты в биологическом материале свежую ткань помещают в ступку, замораживают жидким азотом и обрабатывают, как указано на с. 29. В полученном растворе проводят определение пировиноградной кислоты

Заполнение кювет спектрофотометра для определения пировиноградной кислоты

Объем, мл

Состав пробы контроль- опытная

ная

1. Калий-фосфатный буфер, рН 7,4 . , . 3,0 2,8

2. НАДН — 0,1

3. Раствор фермента или экстракт мышц . . 0,1

Примечание, По контрольной пробе устанавливают и проверяют ноль прибора в ходе работы.

СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ С СЕМИКАРБАЗЙДОМ

а-Кетокислоты в слабокислом растворе дают с семикарбазидом соответствующие семикарбазоны:

R R

C = 0-bH2N—NH—СО—NH2 C = N—NH—СО—NHa.

I " I

СООН СООН

Семикарбазоны а-кетокислот характеризуются максимумом поглощения при строго определенной длине волны (табл. 3). По величине коэффициента молярного поглощения семикарбазона а-кетокислоты рассчитывают содержание последней в исследуемой пробе.

Коэффициент молярного поглощения семикарбазонов кетокислот

а-Кетокислота Длина волны, нм

10,2-Ю3 246—248

12,4-Ю3 252—253

Ю.0-103 247—248

Метод не является специфичным для пировиноградной кислоты. Реактивы:

1. Ацетатный буфер — 0,2 М раствор, рН 4,5.

2. Солянокислый семикарбазид — 0,1 М раствор, приготовленный на ацетатном буфере, непосредственно перед опытом.

3. H2S04 — 0,1 н. раствор.

4. Стандартный раствор пировиноградной кислоты, содержащий от 30 до 70 мкг пировиноградной кислоты в 1 мл, готовят на 0,1 н. H2S04 (раствор сохраняется в холодильнике в течение 5 мес)

В кварцевую кювету спектрофотометра помещают 2,9 мл ацетат-семикарбазидного раствора, добавляют 0,1 мл исследуемого раствора пировиноградной кислоты, осторожно перемешивают и через 5 мин измеряют оптическую плотность при длине волны, характерной для х^емикарбазона пировиноградной кислоты В качестве контроля используют ацетат-семикарбазидный раствор, 3 мл которого наливают во вторую кювету спектрофотометра. Метод предварительно отрабатывают со стандартным раствором пировиноградной кислоты, добавляя в кювету спектрофотометра 0,1 мл раствора, содержащего не более <в,08 мкмоль.

8. ОПРЕДЕЛЕНИЕ НЕОРГАНИЧЕСКОГО ФОСФАТА

Определение ортофосфата используется при концентрационном диализе фосфорных эфиров углеводов и многих других фосфорсодержащих соединений, например креатинфосфата (с. 190) или АТФ <с. 187).

Колориметрические методы для определения неорганического фосфата основаны на измерении интенсивности окраски молибденовой сини 16, образующейся при восстановлении фосфорномолибденовой кислоты в кислой среде. Фосфорномолибденовая кислота является продуктом реакции между фосфорной кислотой и молибденовокислым аммо-рием. Реакция также протекает в кислой среде:

Н3Р04 +12 (NH4) 2М0О4 + 21Н

(NH4) 3Н4[Р (Мо207) в] + 21NH4 А + 10Н2О.

Фосфорномолибденовая кислота относится к гетерополисоедине-ниям — комплексным соединениям, анионы которых образованы двумя различными кислотообразующими окислами, и при этом на молекулу одного из окислов приходится несколько молекул другого. Например, фосфорномолибденовая кислота может быть представлена формулой Р205-24МоОз-яН20.

Молибденовая синь — смесь различных окислов молибдена. Возможный состав молибденовой сини: Мов023 • 8 Н20; Мо4Оц-Н20; Мо205-Н20. Молибденовая синь в растворе находится в коллоидном состоянии, легко адсорбируется поверхностно-активными веществами. Перед фотометрированием нельзя фильтровать уже окрашенные растворы.

Отдельные методы отличаются применяемыми восстановителями и степенью кислотности среды. Кислотность среды не должна быть выше 1,25 н. От природы восстановителя зависит скорость реакции восстановления и чувствительность метода. Если в исследуемом растворе содержится белок, то необходимо его предварительно удалить.

16 Исключение составляет метод Бе

страница 16
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
https://wizardfrost.ru/remont_model_1334.html
инсталляция домашнего кинотеатра в квартире
мебель для раздевалки рабочих цветные
фанкойл ktw 53

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(24.07.2017)