химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

дяной термостат при 38° С. Через определенный промежуток времени (время инкубации и степень разведения ферментного раствора подбирают в пробном эксперименте, как указано выше) к реакционной смеси добавляют 3 мл 50%-ного раствора трихлоруксусной кислоты. Центрифугируют, осадок отбрасывают, рН центрифугата доводят 4 н. раствором щелочи до> 8,0. Добавляют 5 мл 1 М раствора уксуснокислого бария и центрифугируют. Осадок дважды промывают небольшим количеством воды, предварительно доведенной до рН 8,0. Промывные воды объединяют с основным центрифугатом. К полученному раствору добавляют 4 объема 96%-ного этилового спирта, доводят рН до 8,0 и оставляют в холодильнике. Через 2—3 ч выпавший осадок собирают центрифугированием и дважды промывают сначала 96%-ным этиловым спиртом,, затем ацетоном.

Полученный препарат бариевой соли фосфопентоз после высушивания в вакуум-эксикаторе над хлористым кальцием хранят в холодильнике в эксикаторе.

19. ПОЛУЧЕНИЕ ФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТА, СОДЕРЖАЩЕГО ТРИОЗОФОСФАТИЗОМЕРАЗУ И ГЛИЦЕРОЛ-З-ФОСФАТДЕГИДРОГЕНАЗУ^ ИЗ СКЕЛЕТНЫХ МЫШЦ КРОЛИКА

Реактивы:

1. Сульфат аммония — насыщенный раствор.

2. Сульфат аммония — насыщенный раствор, рН 7,5.

3. Сульфат аммония, порошок.

4. Гидроокись аммония — концентрированный раствор, разведенный водой в 2 раза.

Экстракция. Измельченную мышечную массу (с. 221) заливают равным объемом воды и оставляют на 10 мин при периодическом пе~

ремешивании. Центрифугируют 30 мин при 18 ООО g (или отжимают через плотную ткань). Центрифугат сливают. Экстракцию повторяют, используя тот же объем воды, что и в первый раз. Осадок отбрасывают.

Первое фракционирование сульфатом аммония. К объединенным экстрактам, доведенным до рН 7,5, добавляют насыщенный раствор сульфата аммония (рН 7,5) до насыщения 0,52. Оставляют на сутки при периодическом помешивании.

По прошествии указанного времени отбирают небольшой объем •ферментного раствора, центрифугируют 10 мин при 40 ООО g и в центрифугате измеряют фруктозодифосфатальдолазную активность (с. 246). Если она обнаруживается (в противном случае концентрацию сульфата аммония в основном ферментативном растворе сразу доводят до насыщения 0,72; см. ниже), к основному ферментному раствору добавляют еще насыщенный раствор сульфата аммония (рН 7,5) до получения конечной концентрации, равной насыщению 0,54. Оставляют на 2 ч при периодическом перемешивании, после чего центрифугируют 15 мин при 40 000 g (можно фильтровать, используя большие химические воронки и оставлять на ночь).

Осадок отбрасывают, а к центрифугату добавляют при перемешивании измельченный сульфат аммония до насыщения 0,72. Через 15 мин центрифугируют (40 000 g, 20 мин), центрифугат отбрасывают.

Второе фракционирование сульфатом аммония. Осадок, полученный на предыдущей стадии, растворяют в воде (приблизительно 200 мл воды на 1 кг мышц, взятых для работы), рН раствора доводят гидроокисью аммония до 7,5 и добавляют насыщенный раствор сульфата аммония (рН 7,5) до насыщения 0,52. Оставляют в холодильнике на ночь.

Центрифугируют 15 мин при 40 000 g, осадок отбрасывают, к центрифугату добавляют сухой сульфат аммония до насыщения 0,72. Через 15 мин центрифугируют 20 мин при 40 000 g и центрифугат отбрасывают.

Третье фракционирование сульфатом аммония. Осадок, полученный на предыдущей стадии, растворяют в холодной воде (около 200 мл на 1 кг первоначального веса мышц), рН раствора доводят до 6,0. Добавляют холодный насыщенный раствор сульфата аммония до насыщения 0,64.

Оставляют на 30 мин, после чего центрифугируют 20 мин при 40 000 g. Центрифугат отбрасывают, осадок растворяют в небольшом объеме холодной воды, рН раствора доводят до 7,6.

Полученный препарат ферментов в замороженном виде не теряет -своих каталитических свойств в течение нескольких месяцев.

Сульфатно-аммонийную фракцию насыщением 0,52—0,64 можно не растворять в воде, а суспендировать в минимальном объеме раствора сульфата аммония насыщением 0,64 (рН 7,6) и в таком виде хранить в холодильнике при 0—4° С. Активность ферментов практически не меняется в течение нескольких месяцев.

20. КРЕАТИНКННАЗА2

(АТР: КРЕАТИНФОСФОТРАНСФЕРАЗА, КФ 2.7.3.2)

2 Работа предложена Л. В, Белоусовой.

Креатинкнназа катализирует обратимую реакцию переноса фосфо-рильной группы с АТФ на креатин с образованием богатых энергией

соединений креатинфосфата и АДФ: NH2

nh~~po4h,

C = NH

C = NH

N—СН3

+ Mg—атф^:

N—CH3 + Mg—АДФ + H+

ноос—сн2

НООС—СН.

В клетках различных млекопитающих креатинкиназа присутствует в виде трех цитоплазматических изоферментов (мышечного, мозгового* и митохондриального), а также в виде митохондриального изофер-мента.

С открытием митохондриальной креатинкиназы креатинфосфат стал рассматриваться не просто как резерв макроэргического фосфата в клетке, а как основной переносчик химической энергии от митохондрий к местам ее утилизации в клетке. Митохондриальная креатинкиназа превращает синтезированный в митохондриях АТФ в креатинфосфат; в виде креатинфосфата энергия транспортиру

страница 148
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
купить цветочные композиции на стол молодоженов
Компания Ренессанс: монтаж деревянной лестницы цена за работу - надежно и доступно!
кресло метро
сдать вещи на хранение в москве в центре

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(11.12.2016)