химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

осадок растворяют в 5 мл холодной бидистиллированной воды. Диализуют при помешивании в течение 3 ч на холоде против 500 мл воды, которую за это время несколько раз меняют. Можно диа-лизовать в течение ночи против 2 л воды. Осадок, выпавший при диализе, удаляют центрифугированием (10 мин при 25 000 g), к центрифугату добавляют холодную воду до общего объема 8 мл.

3. Реактивы для измерения транскетолазной активности (см. с. 279).

4. Реактивы для определения кетопентоз: солянокислый цистеин — 1,2%-ный раствор;

H2S04 — семь объемов концентрированной H2S04 на три объема воды;

карбазол — 0,1%-ный спиртовой раствор.

5. Трихлоруксусная кислота, 50- и 6,5%-ный растворы.

6. КОН — 4 н. раствор.

7. Уксуснокислый барий — 1 М раствор. » 8. Этиловый спирт.

Я. Ацетон, х. ч.

Прежде чем проводить препаративное получение фосфопентоз, ставят пробный эксперимент, чтобы определить время, требуемое для установления равновесия:

рибозо-5-фосфат^рибулозо-5-фосфат^ксилулозо-5-фосфат.Необходимо также подобрать оптимальную концентрацию ферментного препарата. Все это диктуется, в частности, тем, что ферментные препараты наряду с рибозофосфатизомеразой и рибулозофосфат-3-эпимеразой, как правило, содержат примесь транскетолазы. За счет действия этого фермента часть ксилулозо-5-фосфата, образующегося из рибозо-5-фосфата, будет переходить в седогептулозо-7-фосфат. Его количество в реакционной смеси будет определяться не только соотношением вышеуказанных ферментов, но и их абсолютной концентрацией.

Постановка пробного эксперимента. В химические пробирки наливают по 0,8 мл раствора рибозо-5-фосфата, в одну из них — 0,2 мл основного ферментного раствора, в остальные — по 0,2 мл ферментного раствора, предварительно разведенного холодной водой в 2, 5, 10 и 20 раз. Перемешивают и ставят на инкубацию в водяной термостат при 38° С.

Энзиматический контроль за процессом образования ксилулозо-5-фосфата. Из инкубационной смеси сразу же после погружения пробив рок в термостат, а также через каждые 30 мин отбирают по 0,1 мл, выливают в мерные пробирки и нагревают на кипящей водяной бане в течение 5 мин. Добавляют воду до 1 мл, перемешивают и центрифугируют. Осадок отбрасывают, а центрифугат (или часть его) переносят в спектрофотометрическую кювету, содержащую все необходимые компоненты для определения транскетолазной активности (с. 279), кроме субстрата. Скорость транскетолазной реакции в данном случае должна лимитироваться количеством ксилулозо-5-фосфата, образовавшимся в инкубационной смеси и добавляемым в спектрофотометрическую кювету в составе центрифугата.

Количество ксилулозо-5-фоофата в инкубационной пробе со временем увеличивается, что находит отражение в величине определяемой транскетолазной активности. Когда равновесие между фосфопентоза-ми установится и количество ксилулозо-5-фосфата в инкубационной смеси перестанет нарастать, определяемая величина транскетолазной активности выйдет на стационарный уровень. Равновесие между фос-фопентозами обычно устанавливается в течение 1—3 ч. Для препаративного получения фосфопентоз используют то время инкубации и то количество ферментного препарата, при которых в пробном эксперименте образовалось максимальное количество ксилулозо-5-фосфата.

Химический метод контроля за процессом образования кетофосфо-пентоз. В данном случае определяют суммарное содержание фосфопентоз (ксилулозо-5-фосфата и рибулозо-5-фосфата) в реакционной смеси по цветной реакции с карбазолом. Этот метод до некоторой степени приблизителен, так как не позволяет точно определить время установления равновесия в системе между отдельными фосфопентозами. Последнее объясняется тем, что интенсивность окраски с карбазолом для рибулозо-5-фосфата в три раза выше, чем с ксилулозо-5-фосфатом.

Пробный эксперимент в данном блучае ставится так же, как и? при энзиматическом контроле за процессом образования ксилулозо-5-фосфата (с. 289). Отбираемые пробы (по 0,1 мл) смешивают с 0,9 мл» 6,5%-ного раствора трихлоруксусной кислоты. Центрифугируют и осадок отбрасывают, центрифугат разводят в пять раз водой. Отбирают пробы по 0,2, 0,5, 0,8 мл и каждую доводят водой до 0,8 мл. Добавляют по 0,2 мл солянокислого цистеина, 5 мл серной кислоты и после перемешивания — 0,2 мл 0,1%-ного раствора карбазола. Перемешивают и ставят на 40 мин в водяной термостат при 37° С. По прошествии указанного времени пробы охлаждают и интенсивность развившейся окраски определяют спектрофотометрически при 540 нм. Контрольные пробы содержат вместо исследуемого раствора 0,8 мл воды и обрабатываются, как указано выше.

Прекращение увеличения интенсивности окраски в опытных пробах, последовательно отбираемых из реакционной смеси пробного-эксперимента, указывает на то, что образование фоофокетопентоз из рибозо-5-фосфата прекратилось.

Препаративное получение и выделение смеси фосфопентоз

16 мл аммонийной соли рибозо-5-фосфата смешивают с 4 мл диа-лизованного ферментного раствора, содержащего рибозофосфатизоме-разу и рибулозофосфат-3-эпимеразу, ставят в во

страница 147
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
http://taxiru.ru/shashki-dlya-taxi-all/
светящееся стекло
http://www.prokatmedia.ru/proektor.html
как выровнять ребро жесткости капота

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(23.07.2017)