химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

ный раствор.

2. Этиловый спирт — 96% •

Печень тщательно растирают в ступке с полуторакратным объемом 3%-ного раствора трихлоруксусной кислоты и небольшим количеством промытого песка7 для более полного разрушения клеток. Полученный экстракт центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 мин. При содержании в печени большого количества гликогена су-пернатант представляет собой жидкость молочного цвета. Ее сливают в стакан, а осадок снова растирают с равным объемом 3%-ного раствора трихлоруксусной кислоты, центрифугируют и второй супернатанг объединяют с первым. Если гликогена в печени мало и первый экстракт представляет только опалесцирующий раствор, то второй экстракции не проводят. К раствору гликогена приливают равный объем 96%-ного этанола и тщательно перемешивают Осадок гликогена собирают центрифугированием при 3000 об/мин в течение 30 мин,, а затем гомогенизируют в 2—3 объемах, бидистиллированной воды. Приливают равный объем этанола, перемешивают и снова центрифугируют. Эту операцию повторяют 3—4 раза, после чего осадок гликогена промывают два раза 96%-ным этанолом и высушивают в ваку-умэксикаторе над свежепрокаленным хлористым кальцием.

Стадию многократного переосаждения гликогена спиртом можно заменить диализом. В этом случае осадок гликогена после гомогенизирования в 2—3 объемах дистиллированной воды подвергают диализу против дистиллированной воды (с пятикратной сменой через каждые 2 ч), а затем сушат с помощью лиофильной сушки.

Выход гликогена колеблется в зависимости от упитанности животного. Для увеличения содержания гликогена в печени рекомендуется кролику за 2—3 ч до опыта ввести под кожу или в брюшную полость 10—15 г глюкозы в виде 20—40%-нога раствора.

6. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МОЛОЧНОЙ КИСЛОТЫ

КОЛОРИМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД С п-ОКСИДИФЕНИЛОМ

Метод основан на измерении интенсивности окраски соединения» образующегося в процессе реакции ацетальдегида с «-оксидифенилом в присутствии H2SO4. Ацетальдегид образуется при нагревании молочной кислоты с минеральными кислотами. При его взаимодействии с двумя молекулами л-оксидифенила образуется диоксидифенилэтан,. который в присутствии H2SO4 окисляется в продукт фиолетового цвета с максимумом поглощения при 574 нм. Состав окрашенного производного не известен.

СН3СНОНСООН ? СН3СНО 4- нсоон

но-/ Ч / Ч

\ / \ /

СН3СНО + 2НО~^ Ч—f 4_>.сн3— сн

X / \ / |

но-^ Ч / Ч

1,1-ди (оксидйфенил) этан

7 Кварцевый или речной песок промывают вначале 5%-ным раствором НС1, затем дистиллированной водой до исчезновения кислой реакции в промывных водах,, отсасывают на воронке Бюхнера и прокаливают в муфельной печи.

Метод позволяет определить молочную кислоту в количествах от 0,03 до 0,2 мкмоль в пробе.

Реактивы:

1 Молочнокислый кальций — стандартный раствор (может быть приготовлен из молочнокислого лития или молочнокислого цин- , ка) — 0,25-10-3 М раствор.

2. и-оксидифенил ~— 1,5%-ный раствор в 0,5%-ном NaOH. Навеску и-оксидифенила (75 мг) помещают в коническую пробирку и растворяют в 0,5 мл 5%-ного раствора NaOH, затем добавляют 4,5 мл прокипяченной теплой дистиллированной воды. Раствор хранят при комнатной температуре в темноте. Пробирку удобно закрыть пробкой, снабженной капилляром.

3 H2S04 (х ч.), удельный вес — 1,84

4. CuS04-5H20 (х. ч.) — 20%-ный раствор

5. CuS04-5H20 (х. ч.) — 4%-ный раствор. 6 СаО (в порошке)

7. СС13СООН — 5%-ный раствор.

В центрифужные пробирки вносят 2—3 мл безбелкового трихлор-уксусного фильтрата, для удаления углеводов добавляют 0,5 мл 20%-ного раствора медного купороса, доводят объем до 5 мл, добавляют 0,5 г окиси кальция и тщательно перемешивают Спустя полчаса центрифугируют, отбирают 0,5 мл прозрачного центрифугата в чистые и сухие пробирки8, помещают их в ледяную воду, приливают одну каплю 4%-нога раствора сернокислой меди для уменьшения окислительного потенциала и медленно при постоянном перемешивании добавляют 3 мл концентрированной серной кислоты. Пробирки ставит в кипящую водяную баню на 5 мин (при этом происходит превращение молочной кислоты в ацетальдегид), затем пробы охлаждают до 20° С в холодной воде, добавляют в каждую пробирку по две-три (0,05 мл) капли щелочного раствора я-оксидифенила, осторожно перемешивают и ставят в водяную баню при 30° С. Через 30 мин пробирки погружают точно на 90 с в кипящую водяную баню, затем охлаждают до комнатной температуры и фотометрируют Параллельно ставят пробы со стандартными растворами, содержащими различные количества молочной кислоты. Пробы обрабатывают так же, как и опытные. Строят калибровочный график, по которому определяют содержание молочной кислоты в опытных пробах

Интенсивность развившейся фиолетовой окраски пропорциональна концентрации молочной кислоты (при содержании ее в колориметри-руемых пробах от 0,03 до 0,2 мкмоль). При более высоком содержании молочной кислоты необходимо развести трихлоруксусный фильтрат дистиллированной водой и после этого повторить определение.

ЭНЗИМАТИЧЕСКИЙ МЕТОД

Метод основан на энзиматическом оки

страница 13
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
машины для свадьбы с водителем
прайс ремонта фанкойла краснодар
стенды из пластика пвх для доу своими руками
ремонт холодильника Nord DF 168 WSP

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(23.03.2017)