химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

графии и при ионообменной хроматографии рассчитаны на получение фермента из 500 г мышечной массы.

ЛИТЕРАТУРА

1. В1 ox ham D. P., Lardy Н. A. Phosphofructokinase.//The Enzymes. N. Y. 1973. Vol. 8. P. 239.

2. Kemp R., Foe L. Allosteric regulatory propertiees of muscle Phosphofructokinase// //MolecuL Cell. Biochem. 1983. Vol. 57, N 2. P. 147.

3. Kemp R. G. Phosphofructokinase from rabbit skeletal muscle. N. Y.//Methods in Enzymology. 1975. Vol. 42C. P. 71.

4. Pandian S., Bhatis M., Romaiah A. et al. Puryfication of Phosphofructokinase from rabbit skeletal muscle based on its ability to aggregate in absence of its effectors//AnaIlytical Biochemistry. 1983. Vol. 128, N 2. P. 363.

5. О g a w a Y., Atkinson D. E. Interaction between citrate and nucleoside triphosphates in binding to Phosphofructokinase//Biochemistry. 1985. Vol. 24, N 4. P. 954.

L u t h e r M. A., H e s t e r b e r g Z. K., L e e J. C. Subunit interaction of rabbit muscle Phosphofructokinase: effects of purification procedures//Biochemistry. 1985. Vol.24, N 10. P. 2463.

7. Рапанович И. И. Мышечная фосфофруктокиназа: классический аллостерический фермент//Усп. совр. биохим. М., 1984. Т. 25. С. 236.

8. АЛЬДОЛАЗА

(0-фруктозо-1,6-дифосфат-0-глицеральдегид-3-фосфат-лиаза, КФ 4.1.2.13)

Альдолаза катализирует реакцию расщепления фруктозо-1,6-ди-фюсфата на 3-фосфоглицериновый альдегид и фосфодиоксиацетон. Альдолаза мышечной ткани — тетрамер (молекулярная масса 162 000),

построенный из одинаковых субъединиц. В активном центре идентифицирован остаток лизина, а также цистеин, SH-группа которого мала

2сн2—о—ро2 сн2—о—pof

с=о

сн2—он

+ н—С—ОН

сн2—о—ро;

реакционноспособна Каждая субъединица содержит 8 цистеииовых остатков. Фермент ингибируется ионами тяжелых металлов. АТФ, АДФ и АМФ являются ингибиторами. Альдолаза специфична к фос-фодиоксиацетону, тогда как глицеральдегид-3-фосфат может быть заменен другими альдегидами. Фермент из мышц способен расщеплять фруктозо-1-фосфат, но с меньшей скоростью, чем фруктозо-1,6-дифос-фат. Константы Михаэлиса: для фруктозо-1,6-дифосфата — 0,014 мМ„ для фруктозо-1-фосфата — 7,0 мМ.

Определение активности альдолазы

Активность альдолазы может быть измерена двумя методами: химическим, основанным на определении концентрации продуктов реакции — фосфотриоз (по нарастанию щелочнолабильного фосфора), и энзиматическим, в сопряженной системе, содержащей помимо альдолазы и фруктозо-1,6-дифосфата также НАД+ и глицеральдегид-3-фосфат-дегидрогеназу или НАДН и глицерол-3-фосфатдегидрогеназу. Скорость альдолазной реакции определяют по нарастанию или убыли НАДН.

Химический метод

Метод основан на измерении количества щелочнолабильного фосфора триозофосфатов. Реакция проводится либо в присутствии цианида (вариант I), либо в присутствии гидразина (вариант II).

Вариант I

Реактивы:

1. Глициновый буфер — 0,1 М раствор, рН 9,0, содержащий 5 мМ ЭДТА.

2. Фруктозо-1,6-дифосфат — 2 мМ раствор, приготовленный на 0,1 М глициновом буфере рН 9,0.

3. KCN — 0,1 М раствор, подкисленный до рН 9,0. Работа с цианидом должна проводиться под тягой, раствор следует набирать автоматической пипеткой.

4. NaOH — 2 н. раствор.

5. НС1 —? 2 н. раствор.

6. Реактивы для определения фосфора методом Фиске—Суббароу

(с. 34).

В 4 пробирки помещают по 0,1 мл фруктозодифосфата и 0,2 мл раствора KCN. В каждую пробирку последовательно, с интервалом в

Z, О ШИН, WIUW 1 11VJ V, 1 вал pav-iuupu, ьид^р/иищчи шшдиши^ , иитлил

начало реакции по секундомеру. Инкубацию в первой пробирке проводят в течение 30 с, во второй — 60, в третьей — 90 и в четвертой — 120 с, останавливая реакцию добавлением 0,4 мл 2 н. NaOH. После перемешивания пробы оставляют на 20 мин при комнатной температуре, затем нейтрализуют добавлением 0,4 мл 2 н. НС1 и определяют в них содержание неорганического фосфора. В качестве контроля используют пробу, содержащую вместо раствора альдолазы 0,1 М глициновый буфер.

Вариант II Реактивы:

1. Тризтаноламиновый буфер — 0,1 М раствор рН 8,0.

2. Фруктозо-1,6-дифосфат — 2 мМ раствор, рН 8,0.

3. Гидразин — 0,1 М раствор, рН 8,0.

4. NaOH — 2 н. раствор.

5. НС1 — 2 н. раствор.

6. Реактивы для определения фосфора методом Фиске—Суббароу (с. 34).

В 4 пробирки помещают по 1 мл триэтаноламинового буфера, ?,25 мл раствора (2 мМ) фруктозо-1,6-дифосфата, 0,25 мл раствора (0,1 М) гидразина. В каждую пробирку последовательно, с интервалом в 2—3 мин, вносят по 20 мкл раствора, содержащего альдолазу, отмечая начало реакции по секундомеру. Инкубацию в первой пробирке проводят в течение 30 с, во второй — 60, в третьей — 90 и в четвертой — 120 с, останавливая реакцию добавлением 1,5 мл 2 н. NaOH. После перемешивания пробы оставляют на 20 мин при комнатной температуре, затем нейтрализуют добавлением 1,5 мл 2 н. HCI и определяют в них содержание Фн. В качестве контроля используют пробу, содержащую вместо раствора альдолазы 0,1 М тризтаноламиновый <буфер.

Энзиматичеекий метод

Определение ак

страница 125
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
поселки новая рига карта
кровать стефан 180х200
медные таблички купить
wizardfrost.ru

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(26.05.2017)