химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

овать в широких пределах) инкубируют в течение определенного интервала времени при серии фиксированных значений температуры (2° С, 20°С, 40° С, 60° С), после чего отбирают пробы для определения активности в стандартных условиях.

9. ИССЛЕДОВАНИЕ АЛЛОСТЕРИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ

Известно большое число ферментов со «сложной» негиперболической кинетикой. Одна из причин отклонения от кинетики Михаэлиса— Ментен может быть связана с аллостерическими свойствами фермента. Для регуляторных ферментов кривая зависимости скорости реакции от концентрации субстрата часто имеет сигмоидальную форму. При наличии 5-образности резкое увеличение активности происходит в узкой области концентрации субстрата, что может иметь важное значение для функционирования фермента в клетке. В аллостерической регуляции ферментативной активности принимают участие не только суостраты реакции,

активирующее или ингибирующее влияние. Во многих случаях кривая насыщения аллостерического фермента субстратом имеет вид гиперболы, однако в присутствии аллостерического эффектора она превращается в 5-образную кривую.

Встречается и обратная ситуация, когда 5-образная кривая в присутствии аллостерического эффектора превращается в гиперболическую. Например, пируваткиназа скелетных мышц характеризуется кинетикой Михаэлиса, но в присутствии аллостерического ингибитора (фенилаланина) кривая зависимости скорости реакции от концентрации субстрата становится 5-образной, при этом сродство фермента к субстрату (фосфоенолпирувату) уменьшается. Изменение кинетических свойств под действием аллостерических эффекторов обусловлено конформационной перестройкой молекулы белка. С помощью сшивающих реагентов или каких-либо других воздействий на структуру белка можно наблюдать потерю чувствительности фермента к аллосте-рическим эффекторам. Для выявления аллостерических свойств иногда необходимо изменить условия определения активности: сместить рН реакционной среды в кислую или щелочную область от рН-оптимума или исследовать влияние эффектора при ненасыщенной концентрации субстрата.

Определение кинетических параметров (Кт и V) для ферментов с 5-образной кинетикой затруднено, так как кривые не линеаризуются в двойных обратных координатах. В случае положительной коопера-тивности кривые загибаются кверху, а при отрицательной — книзу. Экстраполяция прямого участка кривой до пересечения с осью абсцисс позволяет определить концентрацию субстрата, при которой скорость реакции равна половине максимальной. Эту величину принято обозначать S0,5- Для описания зависимости скорости реакции от концентрации субстрата в случае аллостерических ферментов применяют преобразованное уравнение Хилла:

V _

в котором Пн^— коэффициент Хилла. Сигмоидный характер кине1иче-ской кривой ""аллостерического фермента объясняют кооперативным взаимодействием между связывающими участками белка. Из уравнения Хилла видно, что величина S05 неэквивалентна Кт- При Яя=1 (в отсутствие кооперативности) Km=[S]0,5, когда птФ\, то Km=[S^H5-Исходя из логарифмической формы уравнения Хилла

lg -~—= пн lg [S]0—nH lg[5]0,5,

V — v

зависимость в координатах \gv/V—v от lg [5] представляет собой прямую, тангенс угла наклона которой равен пн. При определении параметра Пн обычно не получают целого числа. Это объясняется тем, чго коэффициент Хилла указывает не на общее число имеющихся на белке связывающих центров, а на число взаимодействующих центров, поэтому величину пн называют коэффициентом взаимодействия. Определение его важно для обнаружения аллостерических свойств фермента и характеристики степени взаимодействия связывающих центров.

ЛИТЕРАТУРА ,

1. Диксон М., Узбб Э. Ферменты. М., 1982. 3-е изд. Т. 1, 2, 3.

2. Скоупс Р. Методы очистки белков. М., 1985.

3. Методы практической биохимии/Под ред К- Уилсона, Б Уильямса. М., 1978.

4. Номенклатура ферментов. М., 1979.

5. Кочетов Г. А. Практическое руководство по знзимологии. М., 1980. 6 Корниш-БоуденЭ. Основы ферментативной кинетики М, 1979.

7. Доис Э. Количественные проблемы биохимии. М., 1983.

8. Петушкова Е В. Введение в кинетику ферментативных реакций. М., 1972.

9. Уэбб Л. Ингибиторы ферментов и метаболизма. М., 1966. 10. Курганов Б. И. Аллостерические ферменты. М., 1978.

П.Северин Е. С, Курочкин С, Н., Кочетков С. Н. Изучение ферменто» методом химической модификации//Усп. биол. хим. М., 1974. Т. 25. С. 65.

12. Kit z R., Wilson L. В. Esters of methanesulfonic asid as irreversible inhibitors-of acetylcholinesterase//,!. Biol. Chem. 1962. Vol. 237. P. 3245.

III. ВЫДЕЛЕНИЕ, ОЧИСТКА И ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ ФЕРМЕНТОВ

1. ГЕКСОКИНАЗА

(АТФ: D-гексоза-б-фосфотрансфераза, КФ 2.7.1.1)

Гексокиназа катализирует перенос фосфорильного остатка АТФ Hat a-D-глюкозу с образованием a-D-глюкозо-б-фосфата; реакция

практически необратима (AG =—4,0 ккал/моль).

В метаболизме глюкозы дрожжевых клеток участвуют два изози-ма гексокиназы. Изозимы I и II имеют одинаковую молекулярную массу — 102 000 Да, состоят из двух субъединиц с молекулярной массой 52 000 Да

страница 109
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
есть ли курсы автокад в мгсу мытищи
прфессиональное оборудование караоке купить
Кухонные ножи Немецкие в москве
как выбрать качественную батарею на гироскутер

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(07.12.2016)