химический каталог




Практикум по биохимии

Автор С.Е.Северин, Г.А.Соловьева

л раствора и добавляют по 3 мл рабочего реактива. Стандартный график строят для каждой серии определений.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ ГЛЮКОЗООКСИДАЗЫ (МАНОМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД)

Активность глюкозооксидазы определяют по количеству поглощенного кислорода при окислении глюкозы. Поглощение кислорода определяют манометрическим методом Варбурга (с 10).

Реактивы:

1. Фосфатный (или ацетатный) буфер — 0,1 М раствор, рН 5,8.

2. Глюкоза — 7%-ный раствор, приготовленный на буферном растворе за 1—2 ч до начала определения.

3 Глюкозооксидаза — раствор на фосфатном (ацетатном) буфере, содержащий около 0,5—0,6 единиц активности (Е) в 1 мл (препараты глюкозооксидазы Львовского завода бакпрепара-тов имеют активность от 20 до 200 000 Е/г).

5 Если за 10—15 мин окраска не достигнет максимума, это указывает на низкую активность глюкозооксидазы. В таком случае при приготовлении рабочего реактива ее количество следует увеличить.

В центральную часть сосудика Варбурга помещают 1 мл раствора глюкозооксидазы и 0,4 мл буферного раствора, рН 5,8 В боковую реторточку с длинным тубусом наливают 1 мл раствора глюкозы Сосудики пришлифовывают к манометрам, которые при открытых кранах переносят в водяной термостат, отрегулированный на 26° С, и оставляют на 10—15 мин для выравнивания температуры. После этого подводят уровень жидкости в обоих коленах манометра к метке 250, закрывают краны и отсчитывают уровень жидкости в левом (открытом) колене Повертывают реторточки так, чтобы жидкость из них по возможности вся попала в центральную часть сосудика, и включают качающий механизм. Через каждые 10 мин его останавливают, при закрытых кранах доводят уровень жидкости в правом колене манометра до метки 250 и записывают показание левого колена Для учета изменения давления за счет колебания температуры в термостате и изменения барометрического давления во время опыта одновременно с опытными пробами ставят термобарометр (с. 17). Зная константы сосудиков, вычисляют количество поглощенного кислорода в микро-литрах за 1 мин. Одна единица активности глюкозооксидазы соответствует поглощению 1 мкмоль 02 за 1 мин

Рассчитывают число единиц активности в 1 г сухого препарата глюкозооксидазы.

2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГЛЮКОЗЫ ФЕРРИЦИАНИДНЫМ МЕТОДОМ

Метод Хагедорна—Иенсена позволяет определять сахар в небольшом количестве крови (0,1 мл). В основу метода положена реакция восстановления красной кровяной соли (феррицианид калия, железо-синеродистый калий, KsFe(CN)6) в щелочной среде в присутствии глюкозы и некоторых редуцирующих веществ (мочевой кислоты, глута-тиона, креатина, креатинина и др.) в желтую кровяную соль (желе-зистосинеродистый калий, ферроцианид калия, K4Fe(CN)6). Остаток невосстановленного КзРе(СЫ)б определяют йодометрическим титрованием в кислой среде:

КзРе(CN)6+глюкоза->К4ре(CN)6+окисленная глюкоза+КзРе(CN)6-остаток

2K3Fe(CN)6+2KI->2K4Fe(CN)6+I2.

остаток

I2+2Na2S203~>2NaI + Na2S406.

Реакция восстановления феррицианида калия обратима, поэтому ее ведут в присутствии сернокислого цинка. Феррицианид калия выпадает в осадок в виде двойной соли K2Zn3[Fe(CN)e]2 и выводится из реакции

2K4Fe(CN)6+3ZnS04-K2Zn3[Fe(CN)6]2+3K2S04.

Белки, по Хагедорну—Иенсену, осаждают гидратом окиси цинка. Для уменьшения количества редуцирующих веществ, завышающих содержание глюкозы в крови, ряд авторов предложили пользоваться в качестве осадителя белков гидратом окиси кадмия. При этом осадите-ле все редуцирующие вещества, содержащиеся в крови, кроме глюкозы, креатина и креатинина, осаждаются кадмием. В дальнейшем ?определение глюкозы проводят по методу Хагедорна—Иенсена. В этом случае получаются более низкие значения, которые почти полностью соответствуют содержанию глюкозы в крови.

Реактивы:

1. Ыа252Оз (гипосульфит) — 0,005 н. раствор (готовят перед определением из 0,1 н. раствора), проверяют титрованием.

2. K3Fe(CN)6 (красная кровяная соль) — 0,005 н. раствор: 1,65 г перекристаллизованного KaFe(CN)6 растворяют в 1 л дистиллированной воды, содержащей 10,6 г хорошо прокаленного или безводного Ыа2СОз.

3. Глюкоза.

4. NaOH — 0,1 н. раствор.

5 NaOH — 1,1 н. раствор.

6. ZnS04-7H20 — 0,45%-ный раствор.

7. CdS04—1,3%-ный раствор (13 г CdS04, 63,5 мл 1 н. H2S04 и воды до 1 л).

8. H2S04—1 н. раствор.

9. СНзСООН — 3%-ный раствор.

10. Крахмал—1%-ный раствор на насыщенном растворе NaCl

11. Йод-цинковый тройной раствор: 5 г KI, 10 г ZnS04, 50 г NaCl растворяют в 200 мл дистиллированной воды Реактив нестоек, так как KI легко разлагается на свету. Поэтому заранее готовят реактив без него, a KI добавляют перед проведением анализа.

Осаждение белков гидратом окиси цинка в щелочной среде.

В четыре пробирки наливают по 5 мл 0,45%-ного раствора сернокислого цинка и по 1 мл 0,1 н. раствора NaOH, все тщательно перемешивают. В две пробирки с помощью микропипетки помещают по 0,1 мл свежевзятой крови6 (или 0,1 мл исследуемого раствора, содержащего* от 0,1 до 0,3 мг глюкозы). Пипетку двукратно промывают тем же раствором, набирая и выпуская его обратно в про

страница 10
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258

Скачать книгу "Практикум по биохимии" (5.12Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
коттеджные поселки новая рига эконом
imagine dragons 16 июня билеты купить
служба такси курьерская доставка
купить сетку рабицу в рб

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(25.04.2017)