химический каталог




Спутник хроматографиста. Методы жидкостной хроматографии

Автор О.Б.Рудаков, И.А.Востров, С.В.Федоров, А.А.Филиппов и др.

вана поперечным сшиванием эпихлоргидрином, дивинилсуль-фоном или бисэпоксидом (бисоксираном). Носитель на основе целлюлоз обычно используется для олигонуклеотндных лигандов, на182

пример олиго-ЛТ-целлюлоза. В числе других часто используемых носителей - поперечно-сшитый декстран, полиакриламнд, гидро-ксиалкилмстакрилатные полимеры и модифицированные силикагели . Если низкомолекулярный лиганд присоединять на юсрсдственно к носителю, возникающие стерические эффекты могут препятствовать взаимодействию лиганда со специфичным белком. Чтобы предотвратить это, между носителем и лигандом вводится спейсер. Для этой цели обычно используют углеводорсдаые цепи, содержащие 6 или 8 атомов углерода, при этом лиганд удаляется от матрицы на расстояние 0.5-1.0 нм, но иногда «пользуются и более длинные углеводородные цепи длиной до 17 атомов углерода. Углеводородные спейсеры могут влиять на адсорбцию некоторых макромолекул, вступая в гидрофобные взаимодействия с ними; в связи с этим в некоторых случаях предпочтительнее использовать спейсеры, содержащие гидрофильные группы. Бели лиганд - макромолекула, например, белок, то обычно нет необходимости в спейсере, макромолекулярный лиганд можно закрепить непосредственно на твердом носителе. В качестве лиганда может быть использована любая молекула, низкомояекулярная или высокомолекулярная, способная специфически взаимодействовать с белком, нуклеиновой кислотой или другой молекулой, которую нужно хроматографичес-ки отделить. Многие лиганды такие, как субстраты ферментов, лек-тины или антигены, взаимодействуют только с одним типом белка или по крайней мере с очень ограниченным кругом белков. Другие такие, как коферменты (NAD.NADP), нуклеотиды (АТР.АМР.сАМР и т. д.) и иммобилизованные красители, специфически взаимодействуют с более широким, хотя и ограниченным кругом макромолекул и известны как группоспецифические лиганды. В настоящее время доступен широкий набор иммобилизованных лигандов [280].

Для получения а финною сорбента носитель активируют с помощью того или иного реагента, способного образовать ковалент-мую связь с активной группой лиганда. Например, агарозу активируют карбониддиимидазолом или бромоцианом CNBr и за счет аминогруппы лиганда присоединяют его к гелю.

Из нуклеотидов в качестве лигандов применяют ATP, ADP, У-АМР, 7-АМР, З'.эЧАМР, 2',5*-ADP, 3\5*-ADP, dATP, Ар,А, адено183

зин, СЩ СВР, 5-СМР, GTP, GDP, S-GMP, 7-мегил-СТР, UTP, UDP. 5'-UMP, UDP-глкжуроновая кислоту. Наиболее распространенный способ присоединения через С6-гидразидный спейсер, взаимодействующий с альдегидными группами, образующимися в результате периодатного окисления рибозного остатка в ну клеотидах. Имеются также сорбенты со спейсерами различной длины, к которым присоединены аде«шннуюкютиды через N-6 аминогруппу или С-8. В некоторых сорбентах присоединение осуществляется к и -амино-фенольному спейсеру через фосфатную группу. Олигонуклеотиды полинуклеотиды (олиго-dT, олиго-dA, олиго-dC, олиго-dG, оли-ro-dl, ДНК природная и денатурированная, поли-гА, поли-гС, поли-rG, поли-rl, поли-г1)) присоединяются через У-фосфатную группу к целлюлозному носителю или к ага розному носителю.

Коферменты (NAD, NADP, FMN, СоА, HMG-CoA, биотин, дез-тиобиотин, иминобиотин) присоединяются через N-б аминогруппы, С-о или окисленный периодатом рибозный остаток аденина. СоА может связываться через тиольную группу или иметь свободную -SH. Биотин и его аналоги обычно присоединяют к спейсеру через карбоксильную группу боковой цепи.

Все 20 L-аминокислот, найденных в белках, D-аргинин, D-фе-нидаланин, D-триптофан, L-тироксин, глутатион (восстановленный и окисленный), гексил-GSH, сульфобромофталеин-S-GSH. 5-гидроксятрип-тамин, гистамин, спермин, цестеамин, пепстатин присоединяются непосредственно к CNBr-активированной агаро-зе через аминогруппу. Некоторые аминокислоты присоединяются к носителю через спейсер.

Белков и лектины также присоединяются непосредственно к СКВт-а ктивированной агарозе через аминогруппу. Иммуноглобулины, белок A (Staph, aureus), авидин (мономер или тетрамер), ингибитор трипсина (бобы сои и римской фасоли), кальмодулин, пар-вал ьбумин, желатин, гемоглобин, овальбумин, а-лактальбумин, протамин, инсулин и многие ферменты могут быть иммобилизованы в мягких условиях на CNBr-активированной агарозе или агарозе, активированной другим методом.

Углеводы (D-ксилоза, L-фруктоза, D-глкжоза, D-галактоза, D-манноза, D-глюкозамин, Н-ацетил-О-глюкозамин, D-галактозамин, М-ацегил-О-галактозамин, D-лактоза, D-мелибиоза, D-маль-тоза, гепарин) обычно присоединяют по гликозидной (или тиогли-козидной) связи к п-аминофенольному спейсеру или гликозвдамвд-ной связью спейсеру на основе аминогексановой кислоты. В обоих этих типах присоединения необходимо точно устанавливать конфигурацию сахарила у С-1 (а иди Р). Другие способы иммобилизации включают присоединение через гидроксил при С-6 к эпокси-активированной агарозе, присоединение через С-1 кдивинилсуль-фоновому спейсеру и присоединение аминосахаридов через аминогруппу к с

страница 62
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171

Скачать книгу "Спутник хроматографиста. Методы жидкостной хроматографии" (8.06Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
футбольная форма где купить
купить твердотопливный котел длительного горения
курсы конструктор модельер одежды в москве цена
пароувлажнение в системе вентиляции

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(04.12.2016)