химический каталог




Спутник хроматографиста. Методы жидкостной хроматографии

Автор О.Б.Рудаков, И.А.Востров, С.В.Федоров, А.А.Филиппов и др.

ером пор, заполненные разными растворителями - ТГФ, толуолом, хлороформом и ДМФА.

При разделении макромолекул основной вклад в размывание полосы определяется .затрудненной массопередачей. К сожалению, многие из применяемых элюентов имеют высокую вязкость. Для снижения вязкости (а также для улучшения растворимости) экск-люзионную хроматографию часто проводят при повышенных температурах, что существенно улучшает эффективность хроматографической системы.

Анализ большинства полимеров на жестких гелях часто осложняется их адсорбцией. Для подавления адсорбции обычно используют растворители, которые адсорбируются на насадке колонки сильнее, чем анализируемые вещества. Если по каким-либо причинам это невозможно, то подвижную фазу модифицируют добавкой 0,1-2% полярного модификатора, например, тетрагидрофурана.

Значительно более сильными модификаторами являются эти-ленгликоль и полигликоли с различной молекулярной массой (ПЭГ-200, ПЭГ-400, карбовакс 20 М) [57]. Иногда, например, при анализе поликислот в ДМФА, требуется добавка достаточно силь179

ных кислот. Следует отметить, что полностью устранить адсорбцию добавкой модификаторов удается не всегда. В таких случаях рекомендуют полужесткие гели. Некоторые полимеры хорошо растворяются только в высоко полярных растворителях (ацетон, ДМСОи т. п.), месовместимых с гелями на основе СТ-ДВБ. При их разделении на жестких сорбентах выбор растворителя проводят в соответствии с общими принципами, изложенными выше.

Иная ситуация имеет место при проведении эксклюзионной хроматографии в водных средах. Из-за специфических особенностей многих разделяемых систем (белки, ферменты, полисахариды, по-иэдектролиты и др.) и разнообразия применяемых сорбентов существует много вариаций состава подвижней фазы для подавления различных нежелательных эффектов. Общими приемами модификации являются добавка различных солей и применение буферных растворов с определенным значением рН. В частности, поддержание рН<4 дает возможность подавить слабую ионообменную активность силикагелей, обусловленную присутствием на их поверхности кислых силаиольных групп. Требуемая ионная сила подвижной фазы достигается при концентрации буферного раствора 0,05-0,6М. Для предотвращения ионообменной сорбции катионных соединений наиболее часто используют такой активный модификатор, как тетраметиламмонийфосфат при рН=3. Однако при разделении некоторых белков могут проявляться гидрофобные взаимодействия, в свою очередь осложняющие эижлюзионный механизм разделения. Те же эффекты иногда проявляются и при работе сде-зактивировшшыми гидрофгопэными сорбентами. Для их устранения к растворителю добавляют метанол. Иногда в водную ПФ вводят полярные органические растворители, иолигликоли, кислоты, основания и поверхностно-активные вещества. Примеры материалов для эксклюзионной хроматографии приведен в табл. 2.12

Наряду с сорбентами широкого спектра применения разработаны и выпускаются специализированные сорбенты, например, хи-ральнме сорбенты дм разделения рацемических смесей эвантио181

меров ("сорбенты Даванкова"), нуклеотидов и нуклеозидов, оли-гонуклеотидов и РНК, биополимеров и вирусов [152-164.280].

Сорбенты с хиральнымн фазами для разделения энатиомеров в их рацемических смесях получены как на основе хиральных смол, так и на основе силикагеля с привитыми динитробеюошшроиз-водными фенилглицина и лейцина (электроноакцеоторная серия сорбентов) и с привитыми производными нафтилаланина (элект-ронодонорная серия сорбентов). В [152] приведены данные по хс-латообразующим микросетчатьш полистирол ьным смолам с привитыми а-аминокислотами и хиральным фазам на основе силикагеля. Для анализа смесей лекарственных препаратов в биологических жидкостях без удаления из сыворотки пептидов выпускают бифункциональные "сорбенты Пинкертона", внешняя поверхность которых гвдрсфилизирована и не удерживает соединений, а внутренняя гидрофобизирована. Основа сорбента - силикагель. Привитая фаза - трипептид глицилфенилаланш1феиилаланин. Молекулы белков не проникают внутрь глобул, лекарственные препараты проникают внутрь пор сорбента и разделяются.

Что касается специальных сорбентов для аффинной хроматографии, специфически взаимодействующих с белками или другими биологическими молекулами, они представляют собой носители с лигандами, иммобилизованными с помощью ковалентных связей. Например, фермент может взаимодействовать с иммобилизованным субстратом или аналогом субстрата, иммобигагювшшый лектин взаимодействовать с углеводным остатком шикопротеина или рецеп-торный белок со своим специфическим лигандом. Для элюирования абсорбированного белка можно использовать специфические элюенты, например, лиганд или его аналог, или неспецифические факторы такие, как концентрация соли или рН. Сорбенты для аффинной хроматографии обычно состоят из трех ковалентно-связан-ных компонентов: нерастворимого носителя, "ножки" (спеисера) и специфического лиганда. Наиболее часто используемый носитель-это зернистая 4%- и 6%-ная агароза, которая может быть стабилизиро

страница 61
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171

Скачать книгу "Спутник хроматографиста. Методы жидкостной хроматографии" (8.06Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
шинглас джаз терра цена
диагностика чиллера korf
купит площатку для скетбординга
Магазин KNSneva.ru предлагает Kingston HX426C16FR2K4-32 - корпоративные поставки в Санкт-Петербург.

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(27.06.2017)