химический каталог




Спутник хроматографиста. Методы жидкостной хроматографии

Автор О.Б.Рудаков, И.А.Востров, С.В.Федоров, А.А.Филиппов и др.

акромолекул. Обнаружение разделенных компонентов на электрофорсрограмме выполняют, погружая в раствор со специфичным реагентом или опрыскивая бумагу этим реагентом.

При разделении белков и пептидов продуктивен метод изоэлек-трофокусщювания. Разделение смеси проводят в среде, представляющей собой смесь амфотерных соединений, образующих устойчивый градиент рН в постоянном электрическом поле. Соединения с различными изоэлектрическими точками мигрируют до такого положения, в котором рН равен их изоэлектрическим точкам. Устанавливается квазистационарное состояние, миграция соединений прекращается, диффузия компенсируется фокусирующим влиянием электрического поля при градиенте рН. Гипотетическая смесь компонентов А,В,С и D в этом случае расположится между низкомолекулярными амфотерными соединениями М; А/^А. М^В, MfC, Mf D, Mj Где M. - добавленные промежуточные фракции с различными изоэлектрическими точками.

108

В изотахтрорезе используют два электролита - лидирующий электролит, который содержит ион с максимальной электрофоре-тической подвижностью, и концевой электролит, содержащий ион с минимальной подвижностью по сравнению с подвижностью ионов анализируемой смеси АДС и D. Под воздействием электрического поля смесь разделяется на примыкающие друг к другу зоны индивидуальных компонентов, выходящих в порядке понижения их элек-трофорстической подвижности: лцдируюпгий ион , А. В, С, D, концевой ион. Возможность регулирования концентраций в исследуемых зонах за счет изменения свойств лидирующего элеиролита и равномерность концентрации данного компонента внутри каждой зоны делает этот метод особенно ценным для качественного и количественного анализа и препаративного разделения [58].

В гель-электрофорезе смесь заряженных макромолекул разделяется в результате различия в их заряде, размере и скорости миграции через гель, помещенный в электрическое поле. При этом на элек-трофоретическую миграцию молекул оказывает влияние матрица геля и, неотому достигается селективное разделение молекул по размерам. Гели на основе крахмала, агарозы или силикагеля используют в первую очередь для стабилизации зон. Макропористые гели, особенно гели агара и агарозы, наиболее широко применяют в методе иммунтлектрофореза. Особенностью этого метода является обработка смеси белков раствором антисыворотки после проведения электрофоретического разделения. Антисыворотка содержит в себе специфические антитела, воздействующие на индивидуальнью компоненты смеси белков. Антигены и антитела, взаимодействуя между собой, оседают, образуя линии осаждения, каждая из которых должна соответствовать определенному белку. Иммуноэлект-рофорез позволяет проводить идентификацию белков серологическим и физико-химическими методами. Путем введения радиоактивной метки в антигены можно существенно повысить чувствительность метода Эта разновидность электрофореза подучила название радиошщумтлектрофорез [80]. Полиакриламидный гель химически весьма инертен. Его слабое сродство к красителям позволяет быстро обнаруживать биополимеры (белки, нуклеиновые кислоты) по цветным реакциям. Характерен метод электрофореза в градиен109 те плотности полиакриламидного геля. На первом этапе осуществляют зонный электрофорез, в заключение - молекулярно-ситовое разделение. Движение веществ от старта постепенно тормозится вследствие уменьшения пер геля. Ограничение подвижности, вызываемое гелем, приводит к фокусированию зон.

1.4.15. Капиллярный злектрофюрез

Одним из самых современных и перспективных села рационных методов на сегодняшний день является капиллярный электрофорез, вобравший в себя все лучшие качества хроматографических методов и электрофореза. Развитие этого метода началось в конце 70-х, начале 80-х годов прошлого века с работ Микксреа. Эвериртеа, Иор-генсона и Лукаса [207-234]. В этом методе разделение смеси заряженных или нейтральных молекул основано на различии в их электрофоретической подвижности и (или) распределении между раствором и движущимися в электрическом поле заряженными частицами (мицеллами, коллоидными частицами, мсталжжомшкжеами, молекулами полиэлектролита). При анализе методом капиллярного электрофореза пробу небольшого объема (несколько нанолитров) вводят на анодном конце в кварцевый капилляр, заполненный ведущим электролитом (например, фосфатные и боратные буферные растворы с концентрациями 10-100 мМ, растворы органических и неорганических солей, кислот и оснований). К тонкому кварцевому капилляру (внутренний диаметр 25-100 мкм) длиной 20-100 см прикладывают напряжение от 10 до ЗОкВ. Под действием электрического поля компоненты пробы начинают двигаться по капилляру с разной скоростью, зависящей or га структуры, заряда и молекулярной массы, и соответственно, в разное время достигают детектора. Разделение пробы достигается приложением напряжения к буферным сосудам, на электрофоретическое перемещение всегда накладывается более или менее интенсивный элсктроосмотический поток, способствующий пассивной транспортировке зоны пробы, а не ее разделению. Этот эффе

страница 38
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171

Скачать книгу "Спутник хроматографиста. Методы жидкостной хроматографии" (8.06Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
выпрямить вмятину на двери
113R00668
домашняя аудио система
проектор и экран взять в аренду москва

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(23.11.2017)