химический каталог




Спутник хроматографиста. Методы жидкостной хроматографии

Автор О.Б.Рудаков, И.А.Востров, С.В.Федоров, А.А.Филиппов и др.

чно сложными равновесными процессами, конкурирующими между собой. С одной стороны, за счет гидрофобных взаимодействий и эффекта вытеснения из полярной среды подвижной фазы возможна сорбция гидрофобных ионов на поверхности алкил силикагеля таким образом, что алкильный фрагмент динамического модификатора прижат к поверхности, а заряженные группы обращены к подвижной фазе. В этом случае поверхность приобретает ионообменные свойства и удерживание подчиняется закономерностям ионообменной хроматографии. С другой стороны, возможно образование ионной пары непосредственно в объеме элюента, затем эта пара сорбируется, на неполярной поверхности по обращеино-фазовому механизму.

1.4,7. Лигандообматая хроматография

Лигалдооблтиишхроматография, впервые предложенная Даван-ковым [152], также основана на динамическом модифицировании. В этом методе и неподвижная, и подвижная фаза могут содержать комппексообразующий ион металла, в результате чего разделение смеси веществ происходит за счет различия в константах комплек-сообразования веществ и разницы в коэффициентах распределения

69

В качестве ПФ используют водные растворы аммиака в смеси с ацетонитрилом. Оптимальное соотношение воды и ацегонитрила находится в области эквиобъемных составов (примерно 1:1), концентрация аммиака 0.15-0.2 М. В ПФ могут добавлять соли соответствующего мегалла-комплексообразователя. Следует помнить, что силикагель растворяется в щелочных растворах, добавка органического растворителя уменьшает растворимость сорбента. Вместо аммиака в ряде случаев использовали пиридин. При разделении аминокислот на сульфированной полистирольной смоле, заряженной ионами цинка, в качестве подвижной фазы использовали буферные растворы ацетата натрия (рН=4Л), содержащие 3.5-Ю*1 М цинка.

Рис.1.18. Хроматограмма углеводов в пробе растворимого кофе

72

Другим распространённьш применением лигандообменного механизма является разделение моно- и олигосахаридов, а также пояи-ольных соединений. Разделение происходит за счет образования ли-гандного комплекса с ионом металла, иммобилизированным на поверхности катионообменной смолы. В разделение вовлечены также такие механизмы, как сайз-эксклюзия, распределительный механизм, гидрофобная адсорбция, а также электростатическое притяжение и отталкивание. Сорбенты для лигацдообменного разделения углеводов представляют собой, как правило, сульфированный сополимер стирола и дивинилбензола со степенью сшивки 4 - 8%, на поверхности которого электростатически иммобилизирован катион одно-, двух-или трёхвалентного металла (Na*, Ag\ Са!\Sr\ Pb2t, Ва, Y5*, La3*, или Pr**). В качестве подвижной фазы обычно используют деионизован-ную воду. В качестве примера колонок для лигандообменного разделения углеводов можно привести колонки серии REZEX (Фенаменекс, США). В табл. 1.2. приведены времена удерживания некоторых соединений на колонках REZEX в различных ионных формах, а на рис. 1.18 - пример типовой хроматограммы лигшщообменного разделения углеводов в пробе растворимого кофе (свидетельство об аттестации МВИ № 22-03, ЗАО "НПКФ Аквилон", Россия).

1.4.8. Афштая хроматография

Методом афинной хроматографии разделяют полипептиды, белки и другие макромолекулы биологически активных веществ [12,23-28,35-44,48-50,152-174]. Разделение происходит за счет различия в их биоспецифическом взаимодействии с комплементарными сорбционными центрами неподвижной фазы. По сути это вариант лигандообменной хроматографии, дополняющий эксклю-зионную и ионообменную хроматографию, применение которого необходимо, если важно сохранить активность, повысить выход и степень очистки препаративно выделяемого компонента.

Схематично механизм разделения в афинной хроматографии представлен на рис. 1.19. Лиганд L фиксируется на матрице, целевой компонент разделяемой смеси S связывается лигандом и извлекается из раствора, в последующей стадии элюирования комплекс разрушается и сорбат вновь переходит в раствор. Взаимодействие вещества и лиганда должно быть обратимым. Лиганд при помощи реакционно-способных груш осуществляет связь с матрицей, сохраняя при этом биоспецифическую активность. Активные центры многих биологически активных веществ часто локализованы в середине глобулы и недоступны для небольших структур лигандов, непосредственно связанных с матрицей. Поэтому между матрицей и лигандом часто встраивают дополнительный блок - спейсер.

73

Для афинной хроматографии выпускают материалы с различными реакционно-способными группами. В качестве матрицы служат разнообразные гели на основе агарозы или полиакриламида. Тип геля выбирают по виду функциональных групп лиганда. Известны матрицы, на которых лиганды могут быть иммобилизиро-ваны только с помощью конденсирующих агентов. Например, в качестве конденсирующих агентов применяют водорастворимые производные карбодиимида (Ы-зтил-К'-(3"-диметитамиж1про11ич)-карбодиимидгидрохлорид и др.).

уСМ2—СОО

\-н2

Лигандообменну ю хроматографию белков называют также ме-талло-хелат-афинной хроматографией.

rajapoi.-OObCHIOHJC'Hi 0(

страница 24
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171

Скачать книгу "Спутник хроматографиста. Методы жидкостной хроматографии" (8.06Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
купить картриджи brother
треугаольная доска для наружной рекламы
форма футбольная
строительство кинотеатров

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(20.10.2017)