химический каталог




Спутник хроматографиста. Методы жидкостной хроматографии

Автор О.Б.Рудаков, И.А.Востров, С.В.Федоров, А.А.Филиппов и др.

колонок для таких веществ. Оптимальным же решением в данном случае было бы использование специальных колонок со сверхочишенной силикагелевой матрицей и двойным покрытием функциональными группами (например, колонки Luna С18(2) или С8(2) фирмы Phenomenex), обеспечивающими уникальную воспроизводимость при анализе гюлярных соединений. Изменения селективности за счёт привитой фазы могут быть устранены при помощи варьирования силы элюента (содержания органического компонента).

вводами пробы

Если время удерживания (7^ или разрешение (R) пиков не воспроизводятся от анализа к анализу и даже ото дня ко дню, то точ492

ность данного ВЭЖХ метода не может считаться удовлетворительной. Плохая воспроизводимость вызвана, как правило, либо изменениями в условиях хроматографирования, либо изменением эффективности колонки (табл.8.12). Проблемы с воспроизводимостью, вызванные изменением эффективности колонки, выражаются обычно изменением удерживания или ухудшением симметрии пика. В табл. 8.13. приведены возможные характерные симптомы причин плохой воспроизводимости анализов, связанных с колоночными изменениями, а также наиболее вероятные и необходимые действия по их предотвращению. Несмотря на то, что приведённая в табл. 8.13 информация относится к хроматографическим системам как изократического, так и градиентного элюирования, при гради-ентиомэлюировании есть ряд допелшпелъных особенностей. Стандартная колонка 250x4.6 мм имеет внутренний объём приблизительно 2.5 мл и требует, по крайней мере, 10-15 объёмов подвижной фазы для достижения состояния равновесия. Это необходимо учитывать при составлении программы градиента. Самая распространенная ошибка заключается в том, что по окончании градиентного элюирования колонку либо забывают смыть сильной фазой, либо после смывки задают недостаточное время для достижения равноТаблица 8.12. Причины плохой воспроизводимости

Изменения условий хроматографирования Изменения

эффективности

колонки

Изменение подвижной фазы:

• рН

• процент органического модификатора

• концентрация буферного раствора

• концентрация добавок (ион-парного реагента)

• профиль градиента Колонка

неуравновешенна

Колонка перегружена

Изменение температуры Загрязнение колонки

Изменение скорости потока Потеря привитой фазы

493

При недостаточной скорости формирования градиента отдельные компоненты пробы могут накапливаться в колонке, постепенно загрязняя её. Например, если для анализа требуется градиент подвижной фазы с начальным содержанием органического модификатора 10% и конечным 70%. то для того чтобы смыть с колонки все компоненты пробы, этого может быть недостаточно. Необходимо создать концентрацию 75 -100%. Если колонка сильно загрязнена, то необходимо сначала промыть её обратным током с расходом в 5 раз меньшим рабочего. Отсоедините колонку от детектора, переверните её и вымойте из неё весь буферный раствор (если таковой использовался) водой. После этого перейдите на 100% органический растворитель. Наиболее приемлемым для этих целей является ацетонитрил, так как в обращённо-фазовой хроматографии он обладает большей элюирующей способностью, чем метанол. Если этого оказалось недостаточно, перейдите на пропан-2-ол, который более эффективно растворяет многие белки, пептиды и жиры и является более сильным растворителем, чем ацетонитрил или даже ТГФ. При этом помните, что вязкость пропан-2-ола значительно выше, чем ацетонитрила и метанола, поэтому расход по сравнению с рабочим должен быть снижен не менее чем в 3-4 раза.

Плохая воспроизводимость параллельных вводов пробы может быть вызвана и плохой воспроизводимостью смешения компонентов ПФ. Данная причина относится исключительно к недостаткам конструкции ВЭЖХ систем. Для ее устранения следует помнить, что в ВЭЖХ системах с формированием градиента на линии высокого давления динамические миксеры обеспечивают значительно более высокую воспроизводимость смешения, чем статические смесители потока. Особенно сильно это проявляется при смешении растворителей сильно сшшчающихся по вязкости. В системах градиентного элюирования с формированием градиента на линии низкого давления воспроизводимость смешения сильно зависит от степени дегазации компонентов и правильной работы соленоидных клапанов программатора градиента и геометрии камеры смешения.

весия, необходимое для начала следующего анализа, либо то и другое наблюдается одновременно.

494

495

8.7. Регенерация загрязненных колонок

Технически наиболее удобный метод разделения - иэократичес-кая ВЭЖХ. Если при этом подвижная фаза постоянного состава обладает недостаточной элюирующей силой для того, чтобы смыть сильно удерживающиеся (не анализируемые) компоненты пробы с колонки, они накапливаются на сорбенте, и эффективность колонки будет постепенно ухудшаться. Основными симптомами загрязнения колонки являются: увеличение перепада давления, изменение времён удерживания, широкие и "хвостящие" несимметричные пики, потеря разрешения.

Эффективность загрязнённой колонки может быть в большинстве

страница 157
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171

Скачать книгу "Спутник хроматографиста. Методы жидкостной хроматографии" (8.06Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
проектор benq mw621st аренда
Фирма Ренессанс изготовление лестницы из дерева на второй этаж - надежно и доступно!
стул zeta цена
Предложение от KNSneva.ru lenovo ideapad yoga 2 pro купить - поставка техники в СПБ и города северо-запада России.

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(10.12.2016)