чения Rf всех адсорбированных соединений всегда меньше 1,00. Для удобства иногда пользуются значениями hRf{hRf= lOQfy). Величины ^f регулярно публикуются в Journal of Chromatography.

Число теоретических тарелок (JV) определяется по формуле (см. рис. 23.23)

# = 16 (а/6) , (23.26)

Рис. 23.23. Тонкослойная хроматограмма (ТСХ) и способы расчета величины (Ri) и числа теоретических тарелок (N).

Высота, эквивалентная теоретической тарелке (ВЭТТ), связана с числом теоретических тарелок (N) следующей зависимостью:

B3TT = L/JV, (23.27)

где L = А, поэтому

ВЭТТ = 6 /16а (23.28)

23.16.

Обзорная литература: 498. 663, 870, 972, 1092, 1196, 1236, 1251, 1303 1304

1386, 1449.

ТЕХНИКА ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

23.16.1. Приготовление пластинок для ТСХ

Пластинки для ТСХ представляют собой тонкие слои адсорбента (толщина 0,1 — 10 мм), нанесенного на подложку: стеклянную пластинку или алюминиевую фольгу. Промышленность выпускает несколько типов стандартных пластинок для ТСХ размером 20X20 10X20 и 5X20 см.

Диаметр частиц у промышленных адсорбентов, таких, как си-ликагель или оксид алюминия, для ТСХ составляет 1—40 мкм. Для закрепления сорбента на стекле или фольге добавляют гипс (5—20%) или крахмал (2—5%), с помощью которых облегчается Образование равномерного покрытия. Кроме того, можно вводить

и другие добавки, например индикаторы флуоресценции, в частности силикат цинка, облегчающие определение флуоресцирующих веществ под светом ультрафиолетовой лампы.

Пластинки очищают промывкой водой, для чего их погружают на 24 ч в дистиллированную воду, содержащую 1% водного поверхностно активного вещества, затем окончательно промывают дистиллированной водой и высушивают.

На пластинку адсорбент наносят в виде водной пасты. Самым хорошим и воспроизводимым способом нанесения покрытия на пластинку является использование выпускаемого промышленностью специального накатывающего приспособления (валка). Для испарения воды с поверхности пластинку со свеженанесен-ным покрытием оставляют в покое на 15—30 мин. Затем ее помещают на 60 мин в сушильный шкаф при 105—110°С. Хранить пластинки следует в эксикаторе или специальном шкафу в присутствии осушителей.

23.16.2. Способы нанесения проб образца

Образцы исследуются в виде ОД—1%-ных растворов в неполярных летучих растворителях. Растворитель должен быть неполярным

Пластинка для ТСХ/?

5мм .

Ким

_ Предел хроматогрившроеания

?Пятна образца ?

Рис. 23.24. Нанесение проб на пластинку для ТСХ.

для того, чтобы растекание образца в точке нанесения было минимальным. На рис. 23.24 показано, как образец наносится на пластинку.

Раствор образца наносят на пластинку с помощью микрошприца (количество одной пробы 2—10 мкл) в виде отдельных точек. Диаметр таких точек должен быть порядка 2—4 мм, расстояние между их центрами—10—15 мм. Расстояние между точ40

Глава 23

Хроматография

41

г. Родамин В. Около 50 мг этого красителя растворяют в

100 мл этанола. С различными органическими веществами этот

реактив дает розовато-лиловые пятна на розовом фоне. При пропускании паров брома над обработанной хроматограммой фон

обесцвечивается и пятна становятся более интенсивными. При облучении пластинки ультрафиолетовой лампой с длинноволновым

излучением видны оранжевые флуоресцирующие пятна на темном фоне.

д. Хлорид сурьмы(Ш) или сурьмы(У). Эти вещества используются в виде 10—20%-ных растворов в хлороформе или четыреххлористом углероде. При нагревании пластинок, обработанных

ими в течение короткого промежутка времени при 100°С, большинство органических веществ дают пятна различной окраски на белом фоне.

3. Радиоактивные методы.

Обзорная литература: 69, 663, 1029, 1092, 1196, 1251, 1386. Периодическая литература: 2565, 3150, 3339, 5480—5481, 5745, 6294, 6459, 6460, 6467, 6515, 7073.

4. Концентрация образца может быть определена как функция

расстояния на пути его элюирования денситометрическим сканированием проявленных хроматограмм с помощью спектроденситометра. Промышленность выпускает соответствующие приборы, пригодные для проведения таких измерений.

Обзорная литература: 426, 525, 614, 696, 1092, 1251. Периодическая литература: 4614, 5625.

23.17. МЕТОД МНОГОКРАТНОГО

ПРОГРАММИРОВАННОГО ПРОЯВЛЕНИЯ В ТСХ

Для улучшения разрешения стандартной методики ТСХ используется способ многократного проявления. Этот метод заключается в том, что хроматограмма после проявления удаляется из камеры, высушивается и повторно проявляется в том же растворителе. При использовании многократного проявления два 10-сантиметровых проявления занимают меньше времени, чем одно 20-сантиметровое проявление. Наилучшее разделение достигается в том случае, когда Rf компонентов, подлежащих разделению, составляет менее 0,5. Разделение пятен ухудшается, когда среднее значение Rf разделяемых компонентов превышает 0,7.

Особым типом многократного проявления в ТСХ является метод программированного многократного проявления. В этом методе пластинки, использующиеся в ТСХ, проявляютс