химический каталог




Биохимия. Химические реакции в живой клетке. Том 3

Автор Д.Мецлер

дентичных молекул ДНК- Не ясным оставался, однако, вопрос о том, копируется ли исходная двухцепочечная молекула ДНК таким способом, что сразу образуется новая целая двухцепочечная ДНК или же две цепи исходной молекулы разделяются в процессе репликации. В последнем случае (так называемая полуконсервативная репликация) вдоль каждой из Двух разделившихся цепей должна синтезироваться новая 'комплементарная цепь, в результате чего образуются две новые двухцепочечные молекулы.

О получении первых экспериментальных данных, четко указывающих На полуконсервативный способ репликации, сообщили в 1958 г. Месел-сон и Сталь [24]. Клетки Е. coli выращивались на среде, единственным

Источником азота в которой были ионы 15NHj. ДНК бактерий, появившихся через несколько последовательных делений исходных клеток в Данной среде, содержала только стабильный изотоп 15N. Такие бактерии быстро переносили в среду, содержащую I4NH*. Клетки оставляли в сре-Де на время, необходимое, чтобы их количество увеличилось вдвое, вчетверо и т. д. На разных стадиях выделяли ДНК и центрифугировали в гРадиенте плотности хлористого цезия. Небольшие, но легко определяемые различия плотностей позволяли разделять двухцепочечные молекулы ДНК иа три фракции: молекуды, содержащие только I5N; молекулы,

содержащие только частично 15N, и молекулы, содержащие только 14N. В начале опыта присутствовал лишь один тип ДНК, все молекулы которой содержали только 15N. Однако в первом поколении, появившемся после переноса в среду с 14N, плотность всей ДНК указывала на то, что содержание 15N и 14fN в молекулах ДНК было одинаковым. ДНК половины бактерий следующего поколения по-прежнему содержала в равных количествах оба типа изотопов, тогда как у другой половины в ДНК обнаруживали только I4N. Именно такие результаты можно было предсказать, исходя из полуконсервативного способа репликации.

Спустя несколько лет Керне исследовал процесс репликации непосредственно, использовав метод радиоавтографии ДНК с применением тимидина, меченного радиоактивным изотопом водорода — тритием (3Н) [25]. Клетки E.coli выращивали на среде, содержащей 3Н-тимидин, в течение разных промежутков времени, но в типичном опыте — около 1 ч (примерно время двух генераций). Клетки затем разрушали, а расправленные молекулы ДНК выделяли на тонких мембранных фильтрах; после чего готовили радиоавтографы. В результате инкубации с 3Н-ти-мидином на радиоавтографе можно было обнаружить окружности длиной 1,1 —1,4 мм, соответствующие выделенным расправленным молекулам ДНК- Более того, на радиоавтографах можно было заметить молекулы ДНК, меченные частично и находящиеся в процессе репликации. Так, после инкубации в течение 2 ч около половины молекул бактериальной ДНК были полностью мечены, тогда как у другой половины молекул наблюдали зоны, содержание метки в которых было в два раза меньше. Молекулы этих зон несли метку, по-видимому, лишь в одной цепи и, следовательно, соответствовали нереплицировавшимся участкам (один цикл репликации в присутствии 3Н-тимидина успели пройти все молекулы, и это привело к образованию слабо меченных молекул; однако второй цикл у части молекул репликации еще не завершился).' Был сделан вывод, что наиболее интенсивно меченные зоны соответствуют молекулам, в которых репликация произошла полностью. Форма; «репликационных фигур» давала основание думать, что синтез ДНК происходит непрерывно, начинаясь в одной точке и продолжаясь далее вдоль кольцевой молекулы с постоянной скоростью. Несмотря на то что" последующие опыты (разд. Д) показали, что репликация чаще всего происходит не в одном, а в двух направлениях, эксперименты Кернса' имели чрезвычайно важное значение, так как легли в основу метода,* позволяющего непосредственно наблюдать репликацию ДНК in vivo.

а. ДНК-полимеразы

Что же представляют собой предшественники ДНК? В ранних опытах было показано, что нуклеозид 3Н-тимидин интенсивно включается в ДНК. Однако с точки зрения энергетики представлялось маловероятным, что тимидин служит непосредственным предшественником. Данные том, что роль предшественников играют нуклеозидтрифосфаты, были получены в 1958 г., когда Корнберг открыл ДНК-полимеразу E.coli. Для выделения 600 мг фермента Корнберга, называемого обычно ДНК-поли-меразой I, понадобилось 90 кг бактериальных клеток [4, 26] (в каждой клетке содержится около 400 молекул фермента). Этот фермент обладал многими свойствами из предсказанных для ДНК_синтезирующего фермента. Для его работы требовались матричная цепь ДНК и более, короткая затравочная цепь. Как это видно из уравнения (15-2), ДНК^ полнмераза I распознает З'-конец затравочной цепи и присоединяет к нему соответствующий нуклеозидтрифосфат, образующий пару со елеРНК-затравка

Дальше двойная спираль /раскроется здесь

Реплицирую -щиеся фрагменты ДНК

РНК-затравка

Релликационная вилка

Для того чтобы молекула могла образовать репликационную вилку, спираль должна быстро вращаться в указанном направлении

(15-3)

Более серьезная проблема связана с тем, что цепи ДНК ор

страница 85
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258 259 260 261 262 263 264 265 266

Скачать книгу "Биохимия. Химические реакции в живой клетке. Том 3" (6.17Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
решетка 700х100 вр-гнм цена
цена на вытягивание заднего крыла
стулья из экокожи для кухни
автостолица такси

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(19.08.2017)