химический каталог




Биохимия. Химические реакции в живой клетке. Том 2

Автор Д.Мецлер

еет более сложный вид, чем зависимости, представленные на рис. 6-13 и описываемые приведенными выше уравнениями. Однако не составляет труда записать рН-функции Михаэлиса, а также соответствующие уравнения, подобные уравнениям (6-86) — (6-89), и для фермента с любым числам ионогенных групп в формах Е и ES. Следует иметь в виду, что в том случае, .когда свободный субстрат содержит группы, диссоциирующие в том интервале рН, в котором изучается ферментативная активность, в числителе выражения (6-88) появится и рН-Функция для свободного субстрата. Если в изменение активности фермента при варьировании рН вносит вклад изменение конформации белковой молекулы, то возможно кооперативное присоединение или отл^ча более чем одного протона, что должно отразиться на рН-фунюции Михаэлиса. Иногда это может привести к появлению дополнительного члена, аналогичного (4-32). Характер рН-зависимости ферментативной активности был детально проанализирован Диксоном [56], который предложил строить графики зависимости lg Кшах (или логарифма удельной активности) и —lg Км от рН. Типичные кривые такого рода представлены на рис. 6-14. В области значений рН = р/(а± ~ 1,5 график зависимости lg Ктах от рН имеет криволинейную форму, однако за преденами этого интервала ветви кривой асимптотически приближаются* к прямым, наклон которых равен единице, если в процессе диссоциации участвует один протон, или больше единицы, если имеет место кооперативная диссоциация нескольких протонов. Точки (пересечения асимптот с отрезком .прямой, параллельной оси абсцисс (ом. рис. 6-14), соответствуют значениям рКа- (Следует, однако, отметить, что к более надежным результатам приводит описание всех экспериментальных точек единой, теоретической кривой.) Криволинейный участок проходит всегда ниже-(или выше) точек пересечения на величину, равную lg 2 = 0,30 (или меньшую, если диссоциация протонов происходит кооперативно).

Вогнутые участки кривых зависимости lg /См от рН дают значения рКа свободного фермента или свободного субстрата, а выпуклые — значения рКа комплекса ES. Подобный подход к анализу рН-зависимо-стей параметров ферментативной реакции широко применяется энзимо-логами, однако он часто приводит к некорректным результатам. Например, многие кривые такого рода имеют очень резкий перегиб, криволинейный участок у них занимает интервал рН<<3; при этом расстояние-по ординате между кривой и точкой пересечения асимптоты с горизонтальным участком гораздо меньше 0,30^. Это означает, что связывание протонов происходит кооперативно и кажущийся рД"а сходен в таком случае с константой К в уравнении (4-33). Читателю, желающему глубже разобраться в обсуждаемых вопросах, можно рекомендовать теоретическую работу [57], где рассматриваются значения рКа переходного-состояния. Интересный анализ кривых с необычно острым максимумом проведен в работах [57а,Ь].

Примером фермента, детально изученного с точки зрения влияния-рН на кинетические параметры, может служить фумараза — фермент, катализирующий обратимую гидратацию фумаровой кислоты до яблочной [схема (6-64)]. В своей ранней очень интересной работе Алберти и др. [58] показали, что колоколообразная рН-зависимость имеет место как для прямой, так и для обратной реакции. Используя уравнения (6-88) и (6-89), эти исследователи рассчитали кажущиеся значения р/Са для групп а и Ъ фермента в буферных растворах с ионной силой 0,01 (табл. 6-1). Важно отдавать себе отчет в том, что кинетика этой обратимой реакции описывается более сложными уравнениями, чем уравнения (6-87)—(6-89), и поэтому кажущиеся значения рКа могут не совпадать с истинными. Однако очень заманчиво было бы допустить, что два значения рК& для свободного фермента, равные 6,2 и 6,8, соответствуют идентичным группам, по-видимому, имидазольным, со значениями микроскопических рД"а, составляющими ~6,5. Свойства фу-маразы будут обсуждаться далее в гл. 7, разд. 3,6.

1) Удивительно, что для большей части кривых, приводимых Диксоном и Уэббом [56] для иллюстрации рН-профилей ферментативной активности, наблюдается такое же отклонение от теоретической зависимости Многие из полученных значений рКа могут быть некорректными из-за участия в процессе диссоциации нескольких протонов, что приводит к более резким рН-переходам, или в результате экспериментальных -ошибок (например, ошибок, связанных с влиянием буфера).

Мутаротация глюкозы у Е. coli катализируется специфической мута-ротазой [59], .имеющей число оборотов 104 с-1. Форма графика зависимости —lg/См от рН указывает на наличие в свободном ферменте двух ионогенных групп со значениями рКа 5,5 и 7,6, а из характера зависимости lg Kmax от рН следует, что в комплексе ES присутствует одна группа с р/Са = 4,75 [59]. Последняя может представлять собой каталитическую группу [группу В' в схеме (6-79)], возможно имидазол в форме сопряженного основания. Почему группа, имеющая в свободном ферменте рКа = 7,6, никак не проявляется в комплексе ES? Либо эта группа

не участвует в катализе, либо величина р/Са для нее так сильно сдви

страница 27
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258 259 260 261 262 263 264 265 266 267

Скачать книгу "Биохимия. Химические реакции в живой клетке. Том 2" (6.26Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
Рекомендуем компьютерную фирму КНС, промокод на скидку "Галактика" - HP OfficeJet 202 - федеральный супермаркет офисной техники.
KNSneva.ru - гипермаркет электроники предлагает купить ноутбук дёшево - кредит онлайн не выходя из дома в Санкт-Петербурге!
swiss oak сковорода
кисс

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(30.03.2017)