митоз в костном мозге и подавляется синтез ДНК. Заболевание поражает также и другие быстрорастущие ткани, например слизистую оболочку желудка (в результате прекращается секреция НС1) и нервные ткани. Часто наблюдается демиелинизация центральной нервной системы с нарушением координации движений (атаксия) и психотическими расстройствами.

В 1926 г. Мино и Морфи обнаружили, что с пернициозной анемией можно справиться, если употреблять в пищу сырую или слегка поджаренную печень из расчета ]U кг в день—процедура, которую не все больные принимали с энтузиазмом. И только 22 годами позднее был выделен витамин Bi2 (в виде кристаллического производного — цианкобаламина) и было показано, что именно он является целительным агентом. Его содержание в печени составляет приблизительно 1 мг/кг, или ~ 10~6 М. Хотя было предпринято множество попыток получения концентрированных экстрактов печени для лечения пернициозной анемии, отсутствие методов анализа, иных, чем лечение больных людей, замедлило прогресс в этом направлении.

В начале 40-х годов изучение питания молодых животных, получавших рацион с недостаточным содержанием животных белков и охраняемых от контакта с их собственными экскрементами (которые содержат витамин В12), продемонстрировало потребность в «факторе животного белка», который вскоре был идентифицирован как витамин Bi2. В опытах с животными было показано также, что отработанная ферментационная среда стрептомицетов, такая, какую используют для получения стрептомицина и других антибиотиков, чрезвычайно богата витамином В12. Успехам в выделении витамина В12 в значительной мере способствовало признание его роли в качестве фактора роста штамма Lactobacillus lactis. Концентрация витамина, при которой скорость его роста была

равна половине максимальной, составляла всего 0,013 мкг/л (10-» М).

Другим направлением исследований, важным для понимания роли витамина В12, было изучение аномально высокой потребности жвачных животных в кобальте. Вероятно, эта потребность обусловлена необходимостью витамина В12 для микроорганизмов рубца. В тех областях Земли, где содержание кобальта в почве мало, например в Австралии, серьезной проблемой является недостаточность кобальта у овец и крупного рогатого скота.

В 1948 г. красные кобальтсодержащие кристаллы витамина В12 практически одновременно изготовили две крупные фармацевтические фирмы. После адсорбции витамина В12 из экстрактов печени активированным углем использовали элю-цию спиртом и множество других методов фракционирования. Позже выяснилось, что более богатым источником витамина могут служить жидкие ферментационные среды.

Структура. Химические исследования показали, что новый витамин имеет очень большой молекулярный вес, содержит

чсн2

НО^СН3

н

\а а Риоофураиозид ЬиматилоеязимиЬазо^а

НО

Dg1-а ино 2 пропанол

один атом фосфора, который можно отщепить в виде Pi, молекулу Dg-l-aMHHO-2-лропанола и рибофуранозид диметилбен-зимидазола с необычной а-конфигурацией. Отметим, что структура диметилбензимидазола родственна и кольцевой системе рибофлавина (дополнение 8-И). При гидролизе может также высвободиться несколько молекул аммиака из амидных связей кобаламина. Однако все попытки обратимо отделить кобальт из молекулы витамина оставались безрезультатными.

Структура витамина Bi2 была определена Дороти Ходж-кин и ее сотрудниками в 1956 г методом дифракции рентгеновских лучей6. В то время это была самая крупная органическая молекула, структуру которой удалось определить методами рентгеноструктурного анализа Полный лабораторный синтез был завершен в 1972 г.в

Циклическая система витамина Bi2 подобна циклической системе порфиринов (рис. 10-1); она состоит из четырех пир-рольных колец, биосинтетическое родство которых с соответствующими кольцами порфиринов очевидно. Дополнительно присутствует ряд «избыточных» метильных групп. В корриновом кольце витамина Bi2 имеется менее обширная система сопряженных двойных связей, чем в порфиринах, и как результат большое число хиральных центров, расположенных по-периферии колец, несколько выходящих из плоскости объединенного цикла.

Первоначально выделенная форма витамина В12, цианкобаламин, содержит цианид-ион, занимающий одно из координационных положений атома кобальта. Содержание этой формы в природных материалах незначительно (если она вообще присутствует в них), однако цианкобаламин образуется при добавлении цианид-иона в процессе выделения. В природе существует гидроксо- или аквокобаламин (Bi2a), содержащий ОН-, а не CN~. Однако преобладающими формами являются коферментные формы В12, в которых CN- заменен на алкильную группу.

Суточная потребность. Внутримышечное введение столь малого количества кристаллического витамина В12, как 3— 6 мкг, достаточно, чтобы вызвать ремиссию у пациента, больного пернициозной анемией, а доза 1 мкг в день достаточна для поддержания результатов лечения (для этой цели чаще всего вводят аквокобаламин- один раз в две недели). Необходимая пероральная доза, вероятно, значительно (в 2—50 раз)