![]() |
|
|
Биохимия. Химические реакции в живой клетке. Том 2а других " Однако сдвнг полосы поглощения на 5 нм по сравнению с полосой поглощения свободного РМР, указывает, по-внднмому, на отчетливые изменения в окружении хромофора. н I РИС. 8-9. Спектры поглощения различных форм аспартатамииотрансферазы и свобод-иого пиридоксальфосфата. Поглощение [см. уравнение (13-5)] представлено в виде зависимости от энергии квантов света в единицах волновых чисел. Дана также более широко распространенная шкала длин волн. Чаще в приводимых спектрах длина волны возрастает слева направо. Однако форма, которой мы здесь придерживаемся, в настоящее время становится все более распространенной. Переход фермента из формы, наблюдаемой при низких значениях рН (рН<5), в форму, существующую при высоких значениях рН, контролируется группой с р^Са«6,3. Добавление эритро-В-оксиаспартата приводит к хииоидной форме, спектр которой представлен здесь в одну треть от истинной величины. Спектр свободного PLP получен при рН 8,3. Спектр апофермеита (штриховая линия) характеризуется небольшим остаточным поглощением в области 300—400 нм, причина которого ие выяснена. /— (+)s/7«r/7o-p-OH-Asp. 500 им; II — 430 нм, при низком значении рН; /// — 390 нм, свободный PLP, при рН 8,3; IV — 363 нм, при высоком значении рН; У —330 им, PLP. было показано, что (как и можно было бы ожидать для шиффова основания) восстановление боргидридом натрия приводит к переходу спектра поглощения в спектр, сходный с таковым РМР, и прочно присоединяет кофермент к белку. После полного гидролиза соляной кислотой таких восстановленных боргидридом белков была получена флуоресцирующая аминокислота, содержащая восстановленный пиридок-сильный остаток; она во всех случаях была идентифицирована как 8-пиридоксиллизин: сн.он H+N^^>-H2C н3с оЕ-ПириЬаксиллизин Таким образом, PLP-содержащие ферменты в отсутствие субстратов содержат кофермент в форме шиффова основания с е-аминогруппой лизинового остатка белков1). Возможно, что исключением является 6-аминолевулинат-синтетаза [уравнение (8-20)], в которой предполагается существование аддукта между PLP и —SH-группой активного центра [51]. б. Трансальдиминирование Образе .ание шиффова основания PLP с субстратом, по-видимому, происхо/ii.r путем присоединения аминогруппы не к С = 0-группе, а к С—N-группе. За присоединением следует элиминирование, но не группы —ОН, а е-гШ2-группы [уравнение (8-28)]: НзС Боковая цепь остатка лизина „Внутреннее" шиффово основание фермента с кофе+рментО/И (8-28) Восстановление гликогеифосфорилазы боргидридом натрия приводит к прикреп. лениф PLP к боковой цепи лизииа, ио фермент при этом остается удивительно ак« Этот механизм, возможно, используется ферментом, потому что присоединение к —HC=NH+ происходит быстрее [52], чем присоединение к —НС=0. Трансальдиминирование подтверждается временным исчезновением положительного кругового дихроизма (КД) (гл. 13, разд. Б,5) в полосе поглощения кофермента при добавлении субстрата. После превращения субстрата круговой дихроизм появляется вновь1'. е. Полосы поглощения при 500 нм Наиболее поразительны спектры поглощения, полученные в особых условиях для многих PLP-ферментов они содержат интенсивные и необычно узкие полосы в области 500 нм (20«103 см~!). Такая полоса наблюдается у аспартатаминотрансферазы при ее действии на эритро-^-оксиаспартат (рис. 8-9). Этот псевдосубстрат очень медленно претерпевает переаминирование, и накапливающаяся форма, которая поглощает при 500 нм, возможно, возникает как промежуточная структура и в нормальном каталитическом цикле. Аналогичный спектр поглощения обнаруживается при взаимодействии триптофаназы с конкурентным ингибитором L-аланином. В тех же условиях фермент катализирует быстрый обмен а-водорода аланина с 2Н из 2Н20. Сериноксиме-тилаза дает полосу при 495—500 нм как с D-аланином, так и с нормальным продуктом реакции — глицином [53]. Принято считать, что эти полосы обусловлены предполагаемыми хиноидными промежуточными структурами. 7. Построение детальной картины действия PLP-зависимого фермента Рассмотрим ряд различных стадий, через которые должен пройти за ~10~3 с каталитический цикл аминотрансферазы. Во-первых, субстрат связывается ферментом с образованием «комплекса Михаэлиса». Затем в две стадии происходит трансальдиминирование [уравнение (8-28)]. за которым следует отделение а-водорода с образованием хи-ноидной формы субстрат-РЬР-имина. Далее требуются еще четыре стадии для образования кетимина, его гидролиза и освобождения кето-•кислотного продукта с образованием РМР-формы фермента. Последовательности стадий для некоторых других фосфопиридоксалевых ферментов еще более сложны. В случае аспартатаминотрансферазы логично предположить, что положительный заряд аминогруппы субстрата способствует достижению должной ориентации молекулы субстрата благодаря притяжению отрицательным зарядом —0~ в положении 3 кофермента [уравнение (8-28)]. Аналогичным образом некая положительно заряженная группа белка может притягивать а-СОО_-группу субстрата и в ES-к |
[каталог] [статьи] [доска объявлений] [прайс-листы] [форум] [обратная связь] |
|
Введение в химию окружающей среды. Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей
среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги
заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в
разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности.
Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и
атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на
химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах.
Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии
университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга
читателей.
Химия и технология редких и рассеянных элементов. Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов
химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии
лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во
второй
части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана,
лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В
третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия,
тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание
уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В
технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика
рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов
производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие
составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по
1972 год включительно.
|
|