химический каталог




Биохимия. Химические реакции в живой клетке. Том 2

Автор Д.Мецлер

а других

" Однако сдвнг полосы поглощения на 5 нм по сравнению с полосой поглощения свободного РМР, указывает, по-внднмому, на отчетливые изменения в окружении хромофора.

н

I

РИС. 8-9. Спектры поглощения различных форм аспартатамииотрансферазы и свобод-иого пиридоксальфосфата. Поглощение [см. уравнение (13-5)] представлено в виде зависимости от энергии квантов света в единицах волновых чисел. Дана также более широко распространенная шкала длин волн. Чаще в приводимых спектрах длина волны возрастает слева направо. Однако форма, которой мы здесь придерживаемся, в настоящее время становится все более распространенной. Переход фермента из формы, наблюдаемой при низких значениях рН (рН<5), в форму, существующую при высоких значениях рН, контролируется группой с р^Са«6,3. Добавление эритро-В-оксиаспартата приводит к хииоидной форме, спектр которой представлен здесь в одну треть от истинной величины. Спектр свободного PLP получен при рН 8,3. Спектр апофермеита (штриховая линия) характеризуется небольшим остаточным поглощением в области 300—400 нм, причина которого ие выяснена. /— (+)s/7«r/7o-p-OH-Asp. 500 им; II — 430 нм, при низком значении рН; /// — 390 нм, свободный PLP, при рН 8,3; IV — 363 нм, при высоком значении рН; У —330 им, PLP.

было показано, что (как и можно было бы ожидать для шиффова основания) восстановление боргидридом натрия приводит к переходу спектра поглощения в спектр, сходный с таковым РМР, и прочно присоединяет кофермент к белку. После полного гидролиза соляной кислотой таких восстановленных боргидридом белков была получена флуоресцирующая аминокислота, содержащая восстановленный пиридок-сильный остаток; она во всех случаях была идентифицирована как 8-пиридоксиллизин:

сн.он

H+N^^>-H2C

н3с оЕ-ПириЬаксиллизин

Таким образом, PLP-содержащие ферменты в отсутствие субстратов содержат кофермент в форме шиффова основания с е-аминогруппой

лизинового остатка белков1). Возможно, что исключением является 6-аминолевулинат-синтетаза [уравнение (8-20)], в которой предполагается существование аддукта между PLP и —SH-группой активного центра [51].

б. Трансальдиминирование

Образе .ание шиффова основания PLP с субстратом, по-видимому, происхо/ii.r путем присоединения аминогруппы не к С = 0-группе, а к С—N-группе. За присоединением следует элиминирование, но не группы —ОН, а е-гШ2-группы [уравнение (8-28)]:

НзС

Боковая цепь остатка лизина

„Внутреннее" шиффово основание фермента с кофе+рментО/И

(8-28)

Восстановление гликогеифосфорилазы боргидридом натрия приводит к прикреп. лениф PLP к боковой цепи лизииа, ио фермент при этом остается удивительно ак«

Этот механизм, возможно, используется ферментом, потому что присоединение к —HC=NH+ происходит быстрее [52], чем присоединение к —НС=0. Трансальдиминирование подтверждается временным исчезновением положительного кругового дихроизма (КД) (гл. 13, разд. Б,5) в полосе поглощения кофермента при добавлении субстрата. После превращения субстрата круговой дихроизм появляется вновь1'.

е. Полосы поглощения при 500 нм

Наиболее поразительны спектры поглощения, полученные в особых условиях для многих PLP-ферментов они содержат интенсивные и необычно узкие полосы в области 500 нм (20«103 см~!). Такая полоса наблюдается у аспартатаминотрансферазы при ее действии на эритро-^-оксиаспартат (рис. 8-9). Этот псевдосубстрат очень медленно претерпевает переаминирование, и накапливающаяся форма, которая поглощает при 500 нм, возможно, возникает как промежуточная структура и в нормальном каталитическом цикле. Аналогичный спектр поглощения обнаруживается при взаимодействии триптофаназы с конкурентным ингибитором L-аланином. В тех же условиях фермент катализирует быстрый обмен а-водорода аланина с 2Н из 2Н20. Сериноксиме-тилаза дает полосу при 495—500 нм как с D-аланином, так и с нормальным продуктом реакции — глицином [53]. Принято считать, что эти полосы обусловлены предполагаемыми хиноидными промежуточными структурами.

7. Построение детальной картины действия PLP-зависимого фермента

Рассмотрим ряд различных стадий, через которые должен пройти за ~10~3 с каталитический цикл аминотрансферазы. Во-первых, субстрат связывается ферментом с образованием «комплекса Михаэлиса». Затем в две стадии происходит трансальдиминирование [уравнение (8-28)]. за которым следует отделение а-водорода с образованием хи-ноидной формы субстрат-РЬР-имина. Далее требуются еще четыре стадии для образования кетимина, его гидролиза и освобождения кето-•кислотного продукта с образованием РМР-формы фермента. Последовательности стадий для некоторых других фосфопиридоксалевых ферментов еще более сложны.

В случае аспартатаминотрансферазы логично предположить, что положительный заряд аминогруппы субстрата способствует достижению должной ориентации молекулы субстрата благодаря притяжению отрицательным зарядом —0~ в положении 3 кофермента [уравнение (8-28)]. Аналогичным образом некая положительно заряженная группа белка может притягивать а-СОО_-группу субстрата и в ES-к

страница 102
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258 259 260 261 262 263 264 265 266 267

Скачать книгу "Биохимия. Химические реакции в живой клетке. Том 2" (6.26Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
юрист недвижимость москва
images cooper vision
стоимость билетов в кремль н а март
микроавтобус на свадьбу

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(04.12.2016)