химический каталог




Биохимия. Химические реакции в живой клетке. Том 1

Автор Д.Мецлер

ты реакции оказываются смещенными по отношению к ней. Этим методом исследовали фотохимические [149] и другие i[147] реакции флавинов. Аналогичный диагональный электрофорез применялся для идентификации пар —SH-групп, образующих в белках дисульфидные мостики [150]. Пептидные фрагменты, содержащие S—S-мостики, разделяли с помощью электрофореза на бумаге, затем обрабатывали бумагу парами надмуравьиной кислоты, разрывающей мостики [уравнение (2-20)], и после электрофореза в перпендикулярном направлении опрыскивали бумагу нингидрином. Пятна, расположенные вне диагонали, соответствовали фрагментам, которые участвовали в образовании S—S-мостиков. По положению пятен подбирали пары, которые далее сопоставляли с пептидами, охарактеризованными в ходе стандартных операций установления последовательности — операций, проводившихся на белке, окисленном надмуравьиной кислотой.

6. Определение молекулярного веса

1 10 =

Определение молекулярного веса биополимера зачастую оказывается чрезвычайно важным. Во многих случаях можно рассчитать минимальный молекулярный вес, исходя из содержания наименьшего из компонентов (например, триптофана в белке или железа в гемоглобине). Однако в большинстве случаев молекулярные веса определяют физико-химическими методами [151, 152]. В принципе это довольно просто сделать, измерив осмотическое давление и светорассеяние, однако и эти методы имеют свои трудности. Наиболее надежные результаты дает ультрацентрифугирование. Прямое определение молекулярного веса осМол, вес, г/моль

РИС. 2-38. Зависимость константы седиментации ряда белков и нуклеиновых кислот от молекулярного веса (в логарифмическом масштабе). Кружки — глобулярные белки, треугольники — РНК, квадратики — ДНК- В число белков входят липаза (из молока), цитохром с, панкреатическая рибонуклеаза, лизоцим (из белка куриных яиц), фолликулостимулирующий гормон, бактериальные протеазы, гемоглобин человека, бычий протромбин, малатдегидрогеназа, у-глобулин (лошади), триптофаиаза (из Е. coli), глутаматдегидрогеназа (из цыплят) н цитохром а. Двухцепочечная ДНК взята из следующих источников: бактериофага 0X174 (репликативная форма), фагов Т7, ^Ь2, Т2 н Т4 и из вируса папилломы. В число РНК вошли тРНК, рРНК н мРНК Е. coli и РНК вируса желтой мозанки репы («CRC Handbook of Biochemistry», Chem. Rubber publ. Co., Cleveland, Ohio, 1968; S. P. Colowick and N. O. Kaplan, eds., «Me-thods in Enzymology», Vol. 12B, pp. 388—389. Academic Press, New York, 1968).

новано на том, что центрифугирование раствора макромолекул проводят до тех пор, пока не установится седиментационное равновесие [125, 151]. При использовании коротких кювет такое равновесие достигается за несколько часов. Молекулярный вес рассчитывают, измеряя изменение концентрации раствора от центра кюветы к дну.

Чаще всего молекулярный вес биополимеров определяют по их константе седиментации s (разд.ЗЛ.д). Значение s зависит не только от молекулярного веса, но и от плотности и формы молекулы. Однако в рамках предположения, что молекулы белка являются сферами, s примерно пропорционально мол. весу в степени 2/3. Графически зависимость logs от log (мол. вес) должна представляться прямой. На рис. 2-38 приведен график такого рода, построенный по данным для целого ряда белков. Заметим, что точки, полученные для нуклеиновых кислот (во многих случаях эти молекулы имеют форму палочек, а не сфер), ложатся на другую прямую. Кроме того, константа седимента

ции с увеличением молекулярного веса изменяется быстрее, чем это характерно для сферических молекул.

В настоящее время имеется ряд новых методов определения молекулярного веса, которые могут соперничать с ультрацентрифугированием.

Один из них — это простая гель-фильтрация. Колонку тщательно заполняют гелем (например, сефадексом) и калибруют, пропуская ряд белковых растворов. Измеряют Ve — объем элюата, собранного с момента

нанесения вещества на колонку до момента его выхода из колонки, и

делят этот объем на V0 — объем элюата для очень крупных частиц, совершенно не проникающих внутрь частиц геля. Далее строят зависимость Ve/Vo от логарифма мол. веса для ряда белков с известным молекулярным весом. Как и при оценке молекулярных весов по константам седиментации, здесь предполагается, что молекулы всех белков

имеют примерно сферическую форму; для неизвестного белка значение

молекулярного веса определяют по местоположению отвечающей ему

точки на описанном выше графике [153, 154]. Модификацией этого метода служит хроматография при высоких концентрациях гуанидинхлорида — соли, вызывающей денатурацию белков. Предполагается, что в

таком растворителе белковая молекула представляет собой статистический клубок )[154]. +

NH2

H2N—С С14NH2 Гуанидинхлорид

Пожалуй, самым ценным новым методом определения молекулярного веса является гель-электрофорез в присутствии денатурирующего

Яичный альбумин Химотприпсиноген

Цитпохром с

7

26

L

12

0.2 0.3 0,4 0,5 0.6 0,7 0,3 Электпросроретическая поЪвижностпъ Б

Р

страница 73
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176

Скачать книгу "Биохимия. Химические реакции в живой клетке. Том 1" (5.5Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
курсы москва декор ткани
маникюрные ножницы цена
Полки Мэрдэс
гимнастические скамейки для детского сада размеры

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(08.12.2016)