химический каталог




Биохимия. Химические реакции в живой клетке. Том 1

Автор Д.Мецлер

J. Biol. Chem., 243, 4332, 1968; Smith W. L., Bal-lou С. E., J. Biol. Chem, 248, 71 IS—7125, 1973; Gray G. R., Ballou С. E., J. BioL Chem., 247, 8129—8135, 1972.

нуклеозидтрифосфата оставляют немечеными. В присутствии ДНК-по-лимеразы, катализирующей рост цепи, цепь затравочной ДНК удлиняется с З'-конца (гл. 15, разд. А.З.а). Присутствующая матричная цепь [в уравнении (2-30) она не представлена] обеспечивает включение в растущую цепь именно того нуклеотида, какой необходим для образования двуспиральной структуры Уотсона — Крика. Химическая сторона этого процесса будет рассматриваться позже (гл. 15, разд. А.З.а) и в. данном случае значения не имеет. Важно лишь то, что 32Р попадает в. фосфатный мостик, который соединяет нуклеотид, первоначально содержавший 32Р, с З'-гидроксилом соседнего нуклеотида.

Продукт, содержащий 32Р, далее гидролизуют с помощью микрококковой ДНКазы и фосфодиэстеразы селезенки (табл. 2-11). и получают фрагменты, представленные в уравнении 2:30. Поскольку данные гидролитические ферменты катализируют, только- разрывы Ь-тила

6 В положениях, обозначенных зачерненным треугольником, находятся жирные кислоты: 3 ацетила, 1 пропионнл, 1 изобутирил и 1 октаноил; в положениях, обозначенных светлым треугольником, находятся сукцинильные группы. Метильные группы обозначены зачерненным кружком.

(табл. 2-П), 32Р оказывается теперь в составе нуклеотида, который был ближайшим соседом аденозина в структуре ДНК. Измеряя радиоактивность З'-нуклеотидов аденина, тимина, цитозина и гуанина, можно узнать частоты встречаемости в ДНК пар АА, ТА, СА и GA. Используя другие радиоактивные нуклеозидтрифосфаты (по одному типу в каждом опыте), получают такие частоты для всех возможных пар. Результаты описанного выше эксперимента показывают, что цепи двойX

Y

5'\

Затравочная цепь

Ън Р—Р—Рч dATP

ОН

X

Y

(2.30)

НО

~Р НО.

Р но.

ной спирали действительно антипараллельны, как это предсказывали Уотсон и Крик (подробнее об этом см. в книге Дэвидсона [146]), в противном случае частоты ближайших соседей должны были оказаться другими.

Аналогичным образом, но используя расщепление Ь-типа под действием щелочи, были определены частоты встречаемости различных пар в цепи РНК, синтезированной на ДНК-матрице [145].

5. Анализ продуктов

Практически в любом биохимическом исследовании очень важно уметь обнаруживать и точно определять ничтожные количества специфических соединений. Чаще всего для этого используют особые реагенты— индикаторы, которые при взаимодействии со специфическими соединениями определенным образом окрашиваются. Например, для выявления на хроматограмме аминокислот или пептидов, присутствующих в очень малых количествах (доли микромоля), хроматограмму опрыскивают иингидрином (дополнение 8-Е). Если выявляемое соединение находится в растворе, то по интенсивности окрашивания можно определить его количество. Фенолы и концентрированная серная кислота окрашивают сахара (в растворе или на хроматографической бумаге) в красный цвет. Эта реакция лежит в основе колориметрического анализа углеводов. Восстанавливающие сахара выявляют на хроматограммах, опрыскивая последние раствором нитрата серебра.

(2-31)

Нуклеотиды, как и многие другие поглощающие свет соединения, определяют количественно по их спектрам поглощения (рис. 13-11 и 13-12) [146]. Еще более чувствительным методом является флуоресцентный анализ. Например, он позволяет обнаружить на тонкослойной хроматограмме рибофлавин в количестве 3 пикомоль (1 нг) (рис. 2-34) '[147]. Один из новых реагентов, флуорескамин, взаимодействует с любым первичным амином, образуя интенсивно флуоресцирующие продукты. С его помощью можно обнаружить очень малые количества аминокислот— менее 50 пикомолей (рис. 2-36) [148].

Флуоресцирующее соединение

Чрезвычайно чувствительны методы обнаружения летучих соединений с помощью газовой хроматографии. Применяя пламенные ионизационные детекторы, можно определить содержание практически любого соединения в количестве, не превышающем несколько пикомолей. Вряд ли стоит говорить, насколько важна разработка новых, еще более чувствительных методов. Применение наиболее чувствительных из них (в частности, масс-спектрометрии) позволяет теперь в некоторых случаях обнаружить вещество, когда его содержание не превышает нескольких фемтомолей! Анализ выхода нейромедиаторов из одиночных нейронов мозга может иметь принципиальное значение для понимания работы нервных клеток, точно так же как анализ содержимого отдельных клеток может оказаться весьма полезным для выяснения многих вопросов биохимии высших организмов.

Весьма ценной разновидностью обычной тонкослойной или бумажной хроматографии является диагональная хроматография. Сначала нанесенный материал хроматографируют в одном направлении, затем в тонком слое на пластинке или бумаге проводят определенную химическую реакцию, после чего осуществляют разделение в другом направлении. Немодифицированные соединения располагаются по диагонали пластинки, тогда как продук

страница 72
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176

Скачать книгу "Биохимия. Химические реакции в живой клетке. Том 1" (5.5Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
отпуск без указания причин
Rhythm 8REA26WR02
Твердотопливные котлы Dakon DOR F F 32
курсы маникюра d u ;tktpyjljhj;ysq

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(06.12.2016)